稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel)屬鞘翅目(Coleoptera)、象甲科(Curculionidae)、沼澤象亞科(Erirhininae)、水象甲屬(Lissorhoptrus),是一種重要的檢疫性害蟲。在水稻田主要應用化學殺蟲劑進行防治,利用化學農(nóng)藥進行防治,不僅容易引起稻水象甲的抗藥性,而且會造成農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染。昆蟲的嗅覺識別系統(tǒng),與其取食、趨利避害等各種行為關系密切。因此,從研究嗅覺相關基因入手,對稻水象甲的氣味降解酶基因進行挖掘及其作用機制進行探討,可為稻水象甲的防治提供新思路。UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶即尿苷二磷酸糖基轉(zhuǎn)移酶(UGTs)分布廣泛,能夠催化糖基化反應,是昆蟲體內(nèi)非常重要的代謝酶。它主要催化糖基基團,使其從活化的UDP-葡萄糖供體中轉(zhuǎn)移到受體疏水小分子-糖苷配基上,從而使疏水分子形成更親水的化合物以利于高效降解排出。研究表明,UGTs能夠降解氣味小分子,在嗅覺系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,是昆蟲潛在的氣味降解酶之一。本研究以稻水象甲觸角轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎,共篩選鑒定出13個稻水象甲UGTs(LoryUGTs)基因,并將13個基因與已...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮寫表
第一章 前言
    1.1 稻水象甲
    1.2 昆蟲嗅覺分子機制
    1.3 昆蟲氣味降解酶研究進展
    1.4 UGTs在昆蟲中的氣味降解作用
    1.5 項目立題依據(jù)與研究意義
第二章 稻水象甲UGTs基因的鑒定及表達模式分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗昆蟲
        2.1.2 數(shù)據(jù)庫及分析的工具軟件
        2.1.3 實驗試劑與儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 稻水象甲UGTs基因的篩選和鑒定
        2.2.2 多重序列比對及進化樹構(gòu)建
        2.2.3 稻水象甲各組織的分離
        2.2.4 稻水象甲各組織總RNA的提取
        2.2.5 稻水象甲各組織cDNA的合成
        2.2.6 實時熒光定量PCR
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 稻水象甲UGTs基因的鑒定
        2.3.2 稻水象甲UGTs基因的序列分析
        2.3.3 稻水象甲UGTs基因的系統(tǒng)進化分析
        2.3.4 稻水象甲UGTs基因在各組織中的表達模式
    2.4 小結(jié)
    2.5 討論
第三章 稻水象甲UGTs蛋白的同源建模及結(jié)構(gòu)分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 序列來源
        3.1.2 模板選擇及分析的工具軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 結(jié)構(gòu)建模
        3.2.2 模型評價
        3.2.3 結(jié)合位點在分析模型上的添加
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 模型構(gòu)建
        3.3.2 模型評價
        3.3.3 位點預測
    3.4 小結(jié)
    3.5 討論
第四章 稻水象甲UGTs基因的克隆與目的蛋白的表達
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗昆蟲
        4.1.2 菌種
        4.1.3 實驗試劑與儀器
        4.1.4 溶液配方
    4.2 實驗方法
        4.2.1 引物設計
        4.2.2 稻水象甲觸角的分離
        4.2.3 稻水象甲觸角總RNA的提取以及cDNA的合成
        4.2.4 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因全長的克隆
        4.2.5 原核表達載體的構(gòu)建
        4.2.6 重組質(zhì)粒的誘導表達
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因的克隆
        4.3.2 重組質(zhì)粒的電泳檢測
        4.3.3 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因酶切位點的添加
        4.3.4 重組質(zhì)粒的電泳檢測
        4.3.5 重組質(zhì)粒p ET28a-UGT90778 和p ET28a-UGT76491 的構(gòu)建
        4.3.6 重組質(zhì)粒p ET28a-UGT90778 和p ET28a-UGT76491 的驗證
        4.3.7 稻水象甲UGTs基因的原核表達及分析
    4.4 小結(jié)
    4.5 討論
全文結(jié)論
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：3751023