核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)可危害多種油料作物如油菜、大豆和向日葵等,引起菌核病。目前,開發(fā)有效控制核盤菌的措施仍然是值得探討的研究課題。一些真菌病毒可以導(dǎo)致核盤菌致病力發(fā)生衰退,對菌核病具有生防潛力。本研究從安徽省油菜產(chǎn)區(qū)發(fā)病油菜莖稈內(nèi)菌核中分離得到一株核盤菌AH16。該菌株表現(xiàn)為菌絲生長緩慢、菌核產(chǎn)量少以及致病力低。深入研究發(fā)現(xiàn)AH6菌株攜帶有兩種病毒,即核盤菌線粒體病毒4(Sclerotinia sclerotiorum mitovirus 4,SsMV4/AH16)和核盤菌葡萄孢雙節(jié)段ds RNA病毒2(Sclerotinia sclerotiorum botybirnavirus 2,SsBRV2)。SsBRV2為未報道的新病毒。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),SsBRV2單獨(dú)感染時可以導(dǎo)致寄主致病力減弱。從轉(zhuǎn)錄組水平分析比較了SsBRV2和SsBRV1對于核盤菌基因表達(dá)的影響。本研究,一方面獲得了具有菌核病生物防治潛力的新真菌病毒;另一方面,為認(rèn)識其導(dǎo)致核盤菌致病力衰退機(jī)制及研究葡萄孢雙節(jié)段RNA病毒與寄主真菌互作奠定了基礎(chǔ)。核盤菌病毒SsMV4/AH16是一種+...

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1 核盤菌的危害與防治
        1.1 核盤菌的危害與致病機(jī)理
        1.2 菌核病防治
            1.2.1 化學(xué)防治
            1.2.2 農(nóng)業(yè)防治措施
            1.2.3 生物防治
    2 真菌病毒
        2.1 真菌病毒分類概況
        2.2 真菌病毒的傳播
        2.3 真菌病毒與寄主的互作
        2.4 第二代測序技術(shù)與真菌病毒的研究
    3 核盤菌病毒
    4 真菌病毒在植病生防中的應(yīng)用
    5 本研究的意義
第二章 核盤菌弱毒菌株AH16中含真菌病毒鑒定
    1 材料
    2 方法
        2.1 菌株的生物學(xué)特性測定
        2.2 核酸提取及純化
        2.3 病毒序列的克隆與分析
        2.4 病毒粒子的提取和觀察
        2.5 核盤菌原生質(zhì)體制備和再生
        2.6 病毒水平傳播及病毒粒子轉(zhuǎn)染核盤菌原生質(zhì)體
        2.7 病毒結(jié)構(gòu)蛋白肽指紋圖譜分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 核盤菌菌株AH16的dsRNA片段
        3.2 S-dsRNA片段的分析
            3.2.1 S-dsRNA全長c DNA序列
            3.2.2 Ss MV4/AH16系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.3 L-dsRNA片段序列分析
            3.3.1 L-dsRNA全長c DNA序列
            3.3.2 兩條序列的結(jié)構(gòu)特征
            3.3.3 SsBRV2系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.4 SsBRV2的病毒粒子
            3.4.1 病毒粒子形態(tài)
            3.4.2 從病毒粒子中提取到dsRNA
        3.5 通過原生質(zhì)體再生技術(shù)不能獲得AH16的脫毒再生后代
        3.6 SsBRV2的生物學(xué)特性
            3.6.1 SsBRV2的水平傳播受到寄主營養(yǎng)體不親和性限制
            3.6.2 SsBRV2通過病毒粒子可以轉(zhuǎn)染Ep-1PNA367R
            3.6.3 感染SsBRV2的Ep-1PNA367RVT致病力減弱
            3.6.4 Ep-1PNA367RVT生長緩慢，喪失產(chǎn)菌核能力
        3.7 SsBRV2病毒粒子蛋白肽指紋圖譜分析
    4 結(jié)論與討論
        4.1 dsRNA病毒和ss RNA線粒體病毒同時感染核盤菌
        4.2 SsBRV2屬于待定科Botybirnaviridae新成員
        4.3 核盤菌線粒體病毒Ss MV4/AH16與Ss MV1/HC025的比較
        4.4 SsBRV2可單獨(dú)導(dǎo)致核盤菌致病力發(fā)生衰退
第三章 真菌病毒SsBRV2與Ss BRV1影響核盤菌基因表達(dá)的比較分析
    1 材料
    2 方法
        2.1 核盤菌生物學(xué)特性測定
        2.2 病毒的水平傳播
        2.3 轉(zhuǎn)錄組測序
            2.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序總RNA的準(zhǔn)備
            2.3.2 建庫測序
            2.3.3 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1菌株所攜帶病毒的確認(rèn)
        3.2 菌株Ep-1PNA367BRV2、Ep-1PNA367BRV1和Ep-1PNA367致病力及菌落形態(tài)比較
        3.3 核盤菌Ep-1PNA367、Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析
            3.3.1 原始數(shù)據(jù)處理
            3.3.2 差異基因篩選
        3.4 GO注釋分析
            3.4.1 Ep-1PNA367BRV2與Ep-1PNA367差異基因的GO注釋分析
            3.4.2 Ep-1PNA367BRV1與Ep-1PNA367之間GO分析
        3.5 KEGG Pathway分析
            3.5.1 Ep-1PNA367BRV2與Ep-1PNA367之間KEGG分析
            3.5.2 Ep-1PNA367BRV1與Ep-1PNA367之間KEGG分析
        3.6 轉(zhuǎn)錄組中特定差異表達(dá)基因分析
            3.6.1 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1與Ep-1PNA367之間相比，變化趨勢相同的差異表達(dá)基因Go和KEGG分析
            3.6.2 同與Ep-1PNA367相比，Ep-1PNA367BRV2中與Ep-1PNA367BRV1比較特異性變化基因Go和KEGG分析
    4 結(jié)論與討論
全文結(jié)論和展望
    1.結(jié)論
        1.1 證明核盤菌AH16菌株同時感染了兩種真菌病毒，闡明了它們的基因組信息
        1.2 明確了真菌病毒SsBRV2/AH16的分類地位
        1.3 明確了真菌病毒SsBRV2是導(dǎo)致核盤菌弱毒的一個決定因子
        1.4 闡明了真菌病毒SsBRV2和Ss BRV1對于核盤菌基因表達(dá)的影響，為認(rèn)識其導(dǎo)致核盤菌致病力衰退提供了有益線索
    2.展望
        2.1 真菌病毒之間相互作用機(jī)制研究
        2.2 重點(diǎn)基因深入研究
參考文獻(xiàn)
附表1 本研究用到的引物
附表2 肽指紋圖譜鑒定純化的SsBRV2病毒粒子的蛋白
附表3 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1變化趨勢相同的差異表達(dá)基因
附表4 dsRNA片段序列克隆
附錄1 培養(yǎng)基和試劑
附錄2 發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：3747773