寄主植物在遭受植物病原菌的侵染時(shí),能識(shí)別到病原菌所攜帶的病原物相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）從而激活病原物相關(guān)分子模式免疫反應(yīng)（PAMP-triggered immunity,PTI）。植物病原細(xì)菌通過Ⅲ型分泌系統(tǒng)將效應(yīng)蛋白注入植物細(xì)胞,抑制植物的PTI,引起植物效應(yīng)物激發(fā)的敏感性（effector-triggered susceptibility,ETS）。目前大多數(shù)效應(yīng)蛋白與植物之間的相互作用分子機(jī)制仍然不清楚,研究效應(yīng)蛋白與植物之間的相互作用將加深我們對(duì)細(xì)菌致病機(jī)理和植物免疫應(yīng)答的認(rèn)識(shí)。十字花科黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv.campstris,Xcc）是一種重要的植物病原細(xì)菌,能夠在全球范圍內(nèi)侵染十字花科植株,帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前在Xcc 8004中已鑒定了 17個(gè)Ⅲ型效應(yīng)蛋白,但大部分效應(yīng)蛋白與植物之間相互作用的分子機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)XC3176和XC1210這兩個(gè)致病相關(guān)Ⅲ型效應(yīng)蛋白調(diào)控植物的先天免疫進(jìn)行研究。首先通過PEG/Ca介導(dǎo)擬南芥原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng),... 

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 研究植物抗病的重要性
    1.2 PAMPS激活的免疫反應(yīng)-PTI
        1.2.1 PAMPs被寄主的PRRs識(shí)別
        1.2.2 Ca~(2+)濃度增加
        1.2.3 MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)
        1.2.4 防衛(wèi)基因的表達(dá)
        1.2.5 活性氧生成
        1.2.6 胼胝質(zhì)沉積
    1.3 效應(yīng)蛋白激活的免疫反應(yīng)-ETI
        1.3.1 細(xì)菌的Ⅲ型分泌系統(tǒng)
        1.3.2 Ⅲ型效應(yīng)蛋白
        1.3.3 植物的R蛋白
        1.3.4 R蛋白識(shí)別效應(yīng)蛋白激活ETI
    1.4 植物病原菌和寄主植物的相互作用
        1.4.1 植物病原菌和寄主植物的共進(jìn)化作用
        1.4.2 效應(yīng)蛋白與植物的相互作用
    1.5 十字花科黑腐病菌
        1.5.1 XC1210和XC3176
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 材料和方法
    2.1 菌株和質(zhì)粒
    2.2 本實(shí)驗(yàn)中用到的引物
    2.3 實(shí)驗(yàn)用到的培養(yǎng)基
    2.4 實(shí)驗(yàn)所用抗生素、溶液與緩沖液
    2.5 菌株的培養(yǎng)與保藏條件
    2.6 總DNA和質(zhì)粒的提取
        2.6.1 細(xì)菌基因組DNA提取
        2.6.2 擬南芥基因組DNA提取
        2.6.3 質(zhì)粒的小量提取
        2.6.4 質(zhì)粒的大量提取
        2.6.5 質(zhì)粒的濃縮
    2.7 PCR擴(kuò)增
        2.7.1 引物的設(shè)計(jì)
        2.7.2 PCR擴(kuò)增的體系和程序
    2.8 瓊脂糖凝膠電泳
    2.9 DNA的純化、回收、酶切和連接
        2.9.1 DNA的純化和回收
        2.9.2 DNA酶切
        2.9.3 DNA的連接
    2.10 感受態(tài)細(xì)胞的制備、電脈沖轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化子的驗(yàn)證
        2.10.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.10.2 電脈沖轉(zhuǎn)化
        2.10.3 轉(zhuǎn)化子的驗(yàn)證
    2.11 三親本接合及接合子的驗(yàn)證
    2.12 擬南芥轉(zhuǎn)基因
        2.12.1 擬南芥的生長(zhǎng)
        2.12.2 擬南芥的轉(zhuǎn)化
        2.12.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的驗(yàn)證
    2.13 qRT-PCR
        2.13.1 擬南芥RNA的提取
        2.13.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.13.3 qRT-PCR
    2.14 胼胝質(zhì)沉積
    2.15 擬南芥原生質(zhì)體制備、PEG/Ca介導(dǎo)瞬時(shí)表達(dá)及亞細(xì)胞定位
    2.16 擬南芥上致病力的檢測(cè)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 效應(yīng)蛋白亞細(xì)胞定位的構(gòu)建及定位
        3.1.1 亞細(xì)胞定位的構(gòu)建策略
        3.1.2 XC3176和XC1210外源片段的擴(kuò)增
        3.1.3 將XC3176和XC1210克隆到pA7-YFP
        3.1.4 擬南芥原生質(zhì)體的制備
        3.1.5 XC3176和XC1210的亞細(xì)胞定位
    3.2 擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的構(gòu)建
        3.2.1 擬南芥轉(zhuǎn)基因植株所需菌株的構(gòu)建
        3.2.2 載體pBI121
        3.2.3 T1代擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        3.2.4 T2代擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        3.2.5 T3代擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        3.2.6 XC3176和XC1210在轉(zhuǎn)基因植株中正常表達(dá)
    3.3 △3176和△1210在野生型擬南芥中致病力減弱
    3.4 XC3176和XC1210抑制flg22激發(fā)的PTI反應(yīng)
        3.4.1 XC3176抑制flg22所激活的胼胝質(zhì)沉積
        3.4.2 XC3176抑制PTI相關(guān)早期基因的表達(dá)
        3.4.3 XC3176轉(zhuǎn)基因植株中的致病性檢測(cè)
        3.4.4 XC1210抑制flg22所激活的胼胝質(zhì)沉積
        3.4.5 XC1210抑制PTI相關(guān)早期基因的表達(dá)
        3.4.6 XC1210轉(zhuǎn)基因植株中的致病性檢測(cè)
第四章 總結(jié)與討論
    4.1 XC3176和XC1210的亞細(xì)胞定位
    4.2 XC3176和XC1210的突變體在Arabidopsis上的致病力相對(duì)于野生型Xcc8004 明顯下降
    4.3 XC3176和XC1210的表達(dá)會(huì)抑制植物的PTI反應(yīng)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]十字花科黑腐病菌一個(gè)新的Ⅲ型效應(yīng)物XC3176的鑒定[J]. 楊麗超,蘇華,楊鳳,蹇華嘩,周敏,姜偉,姜伯樂.  微生物學(xué)報(bào). 2015(10)



本文編號(hào)：3734135