指狀青霉（Penicillium digitatum）引起的綠霉病是柑橘類水果的主要病害之一,在采后加工、貯藏及運輸過程中易引起果實腐爛,從而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失�；瘜W(xué)農(nóng)藥如三唑類藥物的長期及大量的施用引發(fā)抗藥性菌株涌現(xiàn),這一現(xiàn)象使開發(fā)出有效且可持續(xù)的真菌生物防治方法更為迫切。真菌病毒是一類可感染真菌并在其體內(nèi)復(fù)制的病毒,研究表明一些真菌病毒的感染可導(dǎo)致其真菌宿主的致病力減弱,具有很好的植物致病真菌防治潛能。柑橘指狀青霉中尚未有真菌病毒相關(guān)報道,因此篩選并研究指狀青霉病毒可為柑橘綠霉病的防治提供新思路,同時為探究真菌病毒的分類進(jìn)化及真菌病毒與其宿主間的互作機制提供新的參考信息。本文分離鑒定了兩株柑橘指狀青霉病毒,比較分析了它們對宿主真菌的生理學(xué)及形態(tài)學(xué)影響,探究了其生物防治潛能。本研究主要實驗結(jié)果如下:1、在柑橘指狀青霉菌株HS-RH1中檢測到5kb左右dsRNA片段,對該dsRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)克隆后測序分析表明其全長為5211bp,該序列在GenBank的登錄號為KU933932。利用DNAMAN及ORF Finder預(yù)測該dsRNA的編碼鏈上有兩個開放閱讀框（Open Reading F... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 柑橘病害及防治
        1.1.1 柑橘主要病害
        1.1.2 柑橘采后病害的防治策略
    1.2 真菌病毒的研究進(jìn)展
        1.2.1 真菌病毒分類
        1.2.2 真菌病毒的檢測與鑒定方法
        1.2.3 真菌病毒與宿主關(guān)系
        1.2.4 真菌病毒與病毒進(jìn)化
        1.2.5 真菌病毒的傳播
        1.2.6 真菌病毒與生物防治
    1.3 本文研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 主要培養(yǎng)基與試劑
        2.1.3 本研究所用主要引物
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 指狀青霉菌株的培養(yǎng)與保藏
        2.2.2 菌株生長速度測定
        2.2.3 菌株致病力測定
        2.2.4 菌株咪鮮胺EC_(50)測定
        2.2.5 指狀青霉基因組DNA提取
        2.2.6 Trizol法提取指狀青霉總RNA
        2.2.7 真菌病毒dsRNA提取與純化
        2.2.8 dsRNA全長序列的克隆測序與拼接分析
        2.2.9 真菌病毒粒子提取
        2.2.10 SDS-PAGE法檢測病毒的結(jié)構(gòu)蛋白
        2.2.11 病毒粒體的負(fù)染透射電鏡觀察(TEM)
        2.2.12 真菌病毒dsRNA的Northern Blot驗證
        2.2.13 指狀青霉原生質(zhì)體制備與再生
        2.2.14 原生質(zhì)體再生方法
        2.2.15 聚乙二醇介導(dǎo)真菌病毒的侵染
        2.2.16 高通量測定dsRNA序列
3 實驗結(jié)果與分析
    3.1 指狀青霉HS-RH1中dsRNA病毒的分離鑒定與特性分析
        3.1.1 菌株HS-RH1中存在特殊dsRNA
        3.1.2 菌株HS-RH1中dsRNA的序列測定及分析
        3.1.3 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1的病毒粒子觀察
        3.1.4 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1對宿主真菌的影響
    3.2 指狀青霉HS-RH2中dsRNA病毒的分離鑒定與特性分析
        3.2.1 菌株HS-RH2中存在特殊dsRNA
        3.2.2 病毒PdPmV1的dsRNA序列測定及分析
        3.2.3 菌株HS-RH2中真菌病毒對宿主真菌的影響
4 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間所發(fā)表論文
衷心感謝以下基金資助
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]酵母菌的分離、篩選以及對柑橘保鮮的機理研究[D]. 龍超安.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]核盤菌弱毒菌株SX276生物學(xué)特性及其攜帶RNA病毒的研究[D]. 李波.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]禾谷鐮刀菌低毒病毒FgHV 2-JS 16的全序列分析與生物學(xué)功能研究[D]. 章海龍.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3721526