葡萄霜霉病是葡萄中最嚴(yán)重的真菌病害之一,嚴(yán)重影響著世界各地的葡萄生產(chǎn)。病程相關(guān)蛋白（Pathogenesis-related protein,PR）在植物抗病性中起著重要的作用,然而,關(guān)于其在葡萄抗霜霉病方面的研究很少。本研究前期對(duì)高抗霜霉病的中國(guó)野生葡萄‘留壩-8’和易感霜霉病歐洲葡萄‘黑比諾’接種霜霉菌不同時(shí)期的葉片進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。PR4b是在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中篩選到的一個(gè)在霜霉菌誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的基因。本研究以Vp PR4b為基礎(chǔ),分析其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及亞細(xì)胞定位。然后,利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)獲得‘無(wú)核白’Vv PR4b基因編輯葡萄苗,對(duì)基因編輯株系的葉盤接種葡萄霜霉菌,驗(yàn)證PR4在葡萄霜霉菌侵染過(guò)程中的作用。進(jìn)一步分析了Vp PR4b啟動(dòng)子順式作用元件,通過(guò)酵母單雜交初步篩選Vp PR4b的上游調(diào)控因子。主要取得以下結(jié)果:（1）中國(guó)野生葡萄Vp PR4b和歐洲葡萄Vv PR4b基因均受霜霉菌的誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)模式類似。Vp PR4b和Vv PR4b均含有432個(gè)核苷酸,編碼143個(gè)氨基酸;氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn),Vp PR4b和Vv PR4b均屬于Ⅱ類PR4,N端有信號(hào)肽,C端有Barw... 

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 葡萄霜霉病的研究進(jìn)展
    1.2 病程相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
    1.3 CRISPR/Cas9 研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 VpPR4b的功能分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 質(zhì)粒載體和菌株
        2.1.3 試劑與儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基和試劑配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 葡萄霜霉菌的收集與接種
        2.2.2 PR4b受霜霉菌誘導(dǎo)表達(dá)分析
        2.2.3 VpPR4b和 VvPR4b表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化煙草葉片
        2.2.5 蛋白表達(dá)檢測(cè)
        2.2.6 CRISPR/Cas9 基因編輯的轉(zhuǎn)化體系建立
        2.2.7 基因編輯葡萄檢測(cè)
        2.2.8 基因編輯葡萄抗病功能分析
        2.2.9 引物
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PR4b受霜霉菌誘導(dǎo)的表達(dá)分析
        2.3.2 中國(guó)野生葡萄VpPR4b和歐洲葡萄VvPR4b的克隆
        2.3.3 VpPR4b的定位分析
        2.3.4 CRISPR/Cas9 基因編輯的轉(zhuǎn)化體系建立
        2.3.5 基因編輯葡萄苗檢測(cè)
        2.3.6 基因編輯葡萄抗霜霉病的功能鑒定
    2.4 討論
第三章 VpPR4b啟動(dòng)子功能研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 質(zhì)粒載體和菌株
        3.1.3 試劑與儀器
        3.1.4 培養(yǎng)基和試劑配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 VpPR4b和 VvPR4b啟動(dòng)子克隆
        3.2.2 VpPR4b啟動(dòng)子活性分析
        3.2.3 酵母單雜交篩庫(kù)
        3.2.4 引物
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 VpPR4b和 VvPR4b啟動(dòng)子克隆
        3.3.2 VpPR4b啟動(dòng)子活性分析
        3.3.3 VpPR4b啟動(dòng)子酵母單雜交篩庫(kù)
        3.3.4 VpPR4b啟動(dòng)子互作驗(yàn)證
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]NO和H2O2提高葡萄抗霜霉病的生理作用機(jī)制[J]. 林志強(qiáng),郭秀萍,車永梅,盧江,劉新.  植物病理學(xué)報(bào). 2011(06)
[2]歐亞種葡萄品種對(duì)霜霉病感病性的研究[J]. 李華.  園藝學(xué)報(bào). 1988(01)



本文編號(hào)：3698758