發(fā)布時(shí)間：2022-10-19 16:36

　　蜜蜂囊狀幼蟲病病毒（Sacbrood virus,SBV）所引起的蜜蜂囊狀幼蟲�。⊿acbrood）嚴(yán)重威脅蜜蜂生存,在其幼蟲期、蛹期和成年蜜蜂階段均可感染,具有極強(qiáng)的傳染性,既能夠侵染東方蜜蜂（Apis cerana）,也可以在西方蜜蜂（Apis mellifera）體內(nèi)增殖繁衍,但對東方蜜蜂造成的危害更為嚴(yán)重。為了尋找這兩種蜜蜂對SBV侵染的敏感性和致病性差異的機(jī)制,本試驗(yàn)分別給中華蜜蜂和意大利蜜蜂2日齡幼蟲及新出房成蜂飼喂接種SBV,研究被SBV侵染后中、意蜂幼蟲的體重、發(fā)育歷期、死亡率及成蜂的重量變化和存活率改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)被SBV侵染的中蜂幼蟲均不能正�；疾⑷克劳�;染病意蜂幼蟲體重表現(xiàn)為顯著降低（P＜0.001）,并有12%能夠渡過化蛹階段,但其預(yù)蛹期延長了1.5 d;中、意蜂成蜂在飼喂病毒5日后體重表現(xiàn)為顯著降低（P＜0.05）,死亡率未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）。試驗(yàn)表明SBV主要對蜜蜂幼蟲造成危害,其對中蜂幼蟲的致命性要高于意蜂幼蟲。利用熒光定量PCR技術(shù)對SBV接種后的4日齡、7日齡幼蟲和10日齡、20日齡成蜂體內(nèi)的變態(tài)發(fā)育、營養(yǎng)代謝和免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)行... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1 蜜蜂囊狀幼蟲病
    2 SBV研究現(xiàn)狀
    3 蜜蜂免疫與抗病毒反應(yīng)
        3.1 蜜蜂免疫
        3.2 抗病毒反應(yīng)
    4 RNAi技術(shù)及在蜜蜂中的應(yīng)用
    5 研究意義及內(nèi)容
第二章 接種SBV后對中意蜂發(fā)育的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 供試樣本
            1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 接種病毒液制備
            1.2.2 幼蟲樣本的室內(nèi)飼喂與收集
            1.2.3 成蜂樣本的飼養(yǎng)與采集
            1.2.4 數(shù)據(jù)整理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 SBV對意蜂幼蟲體重變化的影響
        2.2 SBV對中意蜂幼蟲存活率的改變
        2.3 SBV對意蜂幼蟲發(fā)育時(shí)長的影響
        2.4 SBV對中意蜂成蜂重量的改變
        2.5 SBV病毒對中意蜂成蜂壽命的影響
    3 討論與結(jié)論
第三章 SBV感染后對中意蜂體內(nèi)免疫發(fā)育和代謝等基因的影響
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 供試蜜蜂
            1.1.2 主要試劑與儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 RNA提取與c DNA第一條鏈的合成
            1.2.2 引物信息
            1.2.3 熒光定量PCR
            1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 接種SBV對中蜂的影響
            2.1.1 中蜂幼蟲和成蜂病毒感染水平
            2.1.2 對4 日齡幼蟲的影響
            2.1.3 變態(tài)期幼蟲的反應(yīng)
            2.1.4 成年中蜂的影響
        2.2 SBV對意蜂的影響
            2.2.1 意蜂體內(nèi)的SBV水平比較
            2.2.2 對4 日齡意蜂幼蟲的影響
            2.2.3 意蜂變態(tài)期幼蟲反應(yīng)
            2.2.4 對成年意蜂的影響
    3 討論與結(jié)論
第四章 RNAi對 SBV侵染后中意蜂的影響
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 供試蜂群
            1.1.2 主要試劑與儀器
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 目的引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 目的基因的擴(kuò)增
            1.2.3 PCR產(chǎn)物的回收純化
            1.2.4 質(zhì)粒連接反應(yīng)
            1.2.5 質(zhì)粒的純化
            1.2.6 質(zhì)粒的抽提
            1.2.7 含有T7 啟動(dòng)子的引物合成
            1.2.8 含有T7 啟動(dòng)子目的片段的擴(kuò)增
            1.2.9 dsRNA的合成
            1.2.10 dsRNA的純化
            1.2.11 dsRNA干擾試驗(yàn)
            1.2.12 干擾結(jié)果檢測
            1.2.13 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 干擾結(jié)果驗(yàn)證
        2.2 意蜂成蜂干擾效果驗(yàn)證
        2.3 中蜂成蜂干擾效果驗(yàn)證
    3 討論與結(jié)論
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄表A 熒光定量PCR引物信息表
附錄表B 成蜂RNAi試驗(yàn)引物信息表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中華蜜蜂半乳糖凝集素AcGalectin的表達(dá)、純化及性質(zhì)分析[J]. 岳金金,馬宇馳,劉全,姜莉莉,費(fèi)東亮,張鶴,孫莉,李明,馬鳴瀟.  昆蟲學(xué)報(bào). 2018(05)
[2]中華蜜蜂囊狀幼蟲病病毒單克隆抗體的制備與鑒定[J]. 張鶴,李明,孫莉,費(fèi)東亮,岳金金,金宏凱,馬鳴瀟.  病毒學(xué)報(bào). 2017(06)
[3]囊狀幼蟲病病毒的流行及其感染治療[J]. 沈克飛,曹聯(lián)飛,曹蘭,任勤,譚方明,張邑帆.  中國生物制品學(xué)雜志. 2017(09)
[4]中華蜜蜂囊狀幼蟲病靈芝卵黃抗體的探討[J]. 劉建華.  吉林畜牧獸醫(yī). 2017(03)
[5]蜜蜂囊狀幼蟲病研究進(jìn)展[J]. 王永生,宋文菲,楊爽,苗春輝,張永紅.  蜜蜂雜志. 2017(02)
[6]二重PCR快速檢測中蜂囊狀幼蟲病病毒與東方蜜蜂微孢子蟲方法的建立[J]. 林麗花,黃偉峰,陳瓊艷,郭少娟,趙翠霞,雷珊珊,蘇松坤,李繼蓮,黃少康.  中國科技論文. 2016(18)
[7]重慶中華蜜蜂囊狀幼蟲病病毒多聚蛋白基因分子特性分析[J]. 沈克飛,曹蘭,鄭華,楊柳,張邑帆,張素輝.  昆蟲學(xué)報(bào). 2015(09)
[8]中華蜜蜂囊狀幼蟲病病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的制備及其應(yīng)用[J]. 夏曉翠,周冰峰,魏太云.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(05)
[9]蜜蜂囊狀幼蟲病病毒的基因型分析[J]. 曹蘭,沈克飛,張邑帆,羅文華,王瑞生,任勤,郭軍,王志冬,戴榮國.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012(01)
[10]蜜蜂囊狀幼蟲病研究進(jìn)展[J]. 張國只,韓日疇.  中國生物防治. 2008(S1)

碩士論文
[1]西方蜜蜂（Apis mellifera）19 kDa血淋巴蛋白HP19的表達(dá)與功能研究[D]. 王琦.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[2]西方蜜蜂（Apis mellifera）儲(chǔ)存蛋白hex70b和hex110的表達(dá)與功能研究[D]. 楊文靜.福建農(nóng)林大學(xué) 2016



本文編號：3693720