葡萄根瘤蚜Daktulosphaira vitifoliae（Fitch）屬于半翅目Hemiptera根瘤蚜科Phylloxeridae,是為害我國葡萄生產(chǎn)的重要檢疫性害蟲,其幼蟲和成蟲均可吸取寄主植物汁液,形成葉癭和根瘤。目前在我國主要以根瘤型危害為主,危害發(fā)生時(shí)可造成葡萄根系腐爛,嚴(yán)重時(shí)甚至死亡。對(duì)于生活在土壤中的葡萄根瘤蚜,嗅覺在其尋找和定位寄主過程中發(fā)揮著重要作用,而嗅覺相關(guān)蛋白參與昆蟲外圍嗅覺活動(dòng),是昆蟲嗅覺活動(dòng)的分子基礎(chǔ)。因此,對(duì)葡萄根瘤蚜嗅覺相關(guān)蛋白基因進(jìn)行鑒定和功能解析有助于掌握昆蟲嗅覺識(shí)別的分子機(jī)制,也可為進(jìn)一步研究害蟲嗅覺干擾和生物防治提供理論依據(jù)。本研究通過分析葡萄根瘤蚜轉(zhuǎn)錄組,鑒定獲得了27個(gè)葡萄根瘤蚜嗅覺相關(guān)基因,并對(duì)其進(jìn)行了序列分析和基因克隆。并在此基礎(chǔ)上對(duì)葡萄根瘤蚜頭部高表達(dá)的氣味結(jié)合蛋白和化學(xué)感受蛋白進(jìn)行了原核表達(dá)、蛋白純化、熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合和免疫熒光定位研究,得到主要研究結(jié)果如下:1、葡萄根瘤蚜觸角、口器超微結(jié)構(gòu)觀察及感器鑒定為了揭示嗅覺相關(guān)蛋白在感器中的定位,通過掃描電鏡對(duì)該蟲觸角和口器超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察,結(jié)果顯示:觸角柄節(jié)著生2個(gè)毛形感器,梗節(jié)著生2個(gè)毛... 

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲的嗅覺識(shí)別系統(tǒng)及感受識(shí)別機(jī)制
        1.1.1 昆蟲的嗅覺識(shí)別系統(tǒng)
        1.1.2 感受氣味分子的機(jī)制
        1.1.3 氣味分子
    1.2 昆蟲嗅覺相關(guān)蛋白
        1.2.1 氣味結(jié)合蛋白
        1.2.2 化學(xué)感受蛋白
        1.2.3 氣味受體
        1.2.4 感覺神經(jīng)元膜蛋白
        1.2.5 氣味降解酶
    1.3 葡萄根瘤蚜
        1.3.1 葡萄根瘤蚜研究現(xiàn)狀
        1.3.2 本研究的目的和意義
第二章 葡萄根瘤蚜觸角和口器超微結(jié)構(gòu)觀察
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 掃描電鏡觀察
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 葡萄根瘤蚜觸角和口器的整體形態(tài)
        2.2.2 葡萄根瘤蚜觸角和口器感器
    2.3 結(jié)論與討論
第三章 葡萄根瘤蚜嗅覺相關(guān)基因的鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試?yán)ハx
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 總RNA提取及cDNA第一鏈的合成
        3.1.5 葡萄根瘤蚜嗅覺相關(guān)基因的鑒定與序列分析
        3.1.6 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建與分析
        3.1.7 組織分布研究
        3.1.8 開放閱讀框全長(zhǎng)基因的驗(yàn)證
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 DviOBPs的鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析及組織分布研究
        3.2.2 DviCSPs的鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析及組織分布研究
        3.2.3 DviORs的鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析及組織分布研究
        3.2.4 DviSNMP1的鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析及組織分布研究
        3.2.5 DviGSTs的鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析及組織分布研究
    3.3 結(jié)論與討論
第四章 葡萄根瘤蚜寄主植物揮發(fā)物的測(cè)定
    4.1 材料和方法
        4.1.1 供試葡萄根段
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與分析
    4.3 結(jié)論與討論
第五章 葡萄根瘤蚜嗅覺相關(guān)蛋白的原核表達(dá)與純化
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試?yán)ハx
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 緩沖液配制
        5.1.4 主要儀器
        5.1.5 目的蛋白ORF的擴(kuò)增和純化
        5.1.6 克隆載體的連接與轉(zhuǎn)化
        5.1.7 質(zhì)粒雙酶切與表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.1.8 重組蛋白的原核表達(dá)
        5.1.9 重組蛋白的純化
        5.1.10 蛋白濃度測(cè)定
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 DviOBPs和DviCSPs的擴(kuò)增、純化及轉(zhuǎn)化
        5.2.2 重組質(zhì)粒及pET28a(+)雙酶切鑒定
        5.2.3 蛋白表達(dá)菌的轉(zhuǎn)化
        5.2.4 蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        5.2.5 蛋白濃度測(cè)定
    5.3 結(jié)論與討論
第六章 DviCSP2和DviCSP5的結(jié)合特性
    6.1 材料與方法
        6.1.1 蛋白樣品
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 緩沖液的配制
        6.1.4 主要儀器
        6.1.5 蛋白樣品與1-NPN的結(jié)合常數(shù)測(cè)定
        6.1.6 氣味標(biāo)樣的熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 重組蛋白與1-NPN的結(jié)合常數(shù)測(cè)定
        6.2.2 重組蛋白與氣味標(biāo)樣的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)
    6.3 結(jié)論與討論
第七章 葡萄根瘤蚜DviCSP5的免疫熒光定位
    7.1 材料與方法
        7.1.1 供試動(dòng)物
        7.1.2 主要試劑
        7.1.3 緩沖液配制
        7.1.4 主要儀器
        7.1.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建、蛋白質(zhì)的純化、透析及蛋白濃度測(cè)定
        7.1.6 多克隆抗體的制備
        7.1.7 抗體效價(jià)檢測(cè)
        7.1.8 Westernblot檢測(cè)多克隆抗體的特異性
        7.1.9 葡萄根瘤蚜DviCSP5的免疫熒光定位
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 抗體效價(jià)檢測(cè)
        7.2.2 DviCSP5免疫熒光定位
    7.3 結(jié)論與討論
第八章 結(jié)論與展望
    8.1 結(jié)論
    8.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]核桃舉肢蛾性信息素結(jié)合蛋白2的分子克隆和免疫熒光定位[J]. 李文海,黃興龍,王敦,馮紀(jì)年.  昆蟲學(xué)報(bào). 2015(10)
[2]Effects of intercropping vines with tobacco and root extracts of tobacco on grape phylloxera, Daktulosphaira vitifoliae Fitch[J]. WANG Zhong-yue,SU Jun-ping,LIU Wei-wei,GUO Yu-yuan.  Journal of Integrative Agriculture. 2015(07)
[3]松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及組織表達(dá)譜和原核表達(dá)研究[J]. 錢凱,馮波,巫詡亮,勞沖,沈幼蓮,杜永均.  昆蟲學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]刺桐姬小蜂雌成蟲對(duì)寄主植物揮發(fā)物的嗅覺行為反應(yīng)[J]. 李軍,梁廣文,郭強(qiáng),蔣露,戴建青,韓詩疇.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(01)
[5]光肩星天牛對(duì)植物源揮發(fā)物的觸角電位和行為反應(yīng)[J]. 范麗清,嚴(yán)善春,孫宗華,孟昭君.  生態(tài)學(xué)雜志. 2013(01)
[6]蚜蟲觸角感受器結(jié)構(gòu)及功能研究進(jìn)展[J]. 趙立靜,班麗萍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2011(04)
[7]根瘤蚜對(duì)不同抗性葡萄的選擇性及葡萄根系揮發(fā)性物質(zhì)的鑒定[J]. 杜遠(yuǎn)鵬,鄭秋玲,翟衡,蔣恩順,王忠躍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(05)
[8]松脂單萜類物質(zhì)與油松對(duì)紅脂大小蠹抗性的關(guān)系[J]. 賈洪敏,黃大莊,曹逸霞,孔祥波,張真.  東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(01)
[9]部分葡萄品種和砧木抗葡萄根瘤蚜性能鑒定[J]. 杜遠(yuǎn)鵬,王兆順,孫慶華,翟衡,王忠躍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2008(01)
[10]昆蟲氣味受體研究進(jìn)展[J]. 喬奇,原國輝,李海超,郭線茹,羅梅浩.  昆蟲學(xué)報(bào). 2008(01)

博士論文
[1]梨小食心蟲識(shí)別寄主植物揮發(fā)物的分子機(jī)制[D]. 李廣偉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]棉鈴蟲嗅覺相關(guān)蛋白的鑒定及功能研究[D]. 張?zhí)鞚?西北農(nóng)林科技大學(xué) 2011

碩士論文
[1]蚜總科昆蟲口器的比較形態(tài)學(xué)研究（昆蟲綱：半翅目）[D]. 葛孚瑢.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]茄無網(wǎng)蚜氣味結(jié)合蛋白OBP7的克隆、表達(dá)譜及其觸角和腹管超微結(jié)構(gòu)觀察[D]. 趙雪.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3690929