桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis（Hendel）是熱帶、亞熱帶地區(qū)重大的果蔬害蟲。目前化學(xué)農(nóng)藥是防治桔小實(shí)蠅的主要方法,其中有機(jī)磷殺蟲劑敵百蟲因其高效且對(duì)人類低毒而被廣泛應(yīng)用于該蟲的防治。但由于敵百蟲的泛濫使用,導(dǎo)致桔小實(shí)蠅對(duì)敵百蟲的抗藥性不斷增強(qiáng)。桔小實(shí)蠅腸道中存在大量的共生菌,已有研究發(fā)現(xiàn)敵百蟲抗性品系桔小實(shí)蠅腸道中的檸檬酸桿菌明顯增加,經(jīng)分離鑒定后確定這種共生細(xì)菌為弗氏檸檬酸桿菌Citrobacter freundii-BD（CF-BD）。為了明確腸道共生菌CF-BD與桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性的關(guān)系,本文研究了CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性的影響,探清了CF-BD提高桔小實(shí)蠅對(duì)敵百蟲抗藥性的機(jī)制,闡明了該菌的傳播方式,不僅為桔小實(shí)蠅對(duì)殺蟲劑抗性產(chǎn)生的機(jī)制研究提供了新思路,也對(duì)未來(lái)桔小實(shí)蠅防治策略的制定提供了新的理論支持。主要研究結(jié)果如下:1、CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性的影響為了明確CF-BD與桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性是否有關(guān),分別對(duì)喂食CF-BD后的敏感品系桔小實(shí)蠅、喂食抗生素以去除CF-BD的抗性品系桔小實(shí)蠅進(jìn)行了敵百蟲毒力測(cè)定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)喂食CF-BD的敏感品系桔... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要 abstract 1 前言
1.1 研究背景
    1.1.1 昆蟲的抗藥性
    1.1.2 昆蟲與共生菌
    1.1.3 高通量測(cè)序
    1.1.4 昆蟲共生菌的傳播
1.2 研究目的及意義
1.3 技術(shù)路線 2 CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性的影響及在腸道中的定位
2.1 引言
2.2 材料與方法
    2.2.1 試驗(yàn)材料
    
2.2.1.1 供試?yán)ハx
    
2.2.1.2 CF-BD的復(fù)蘇與培養(yǎng)
    2.2.2 試劑
    2.2.3 主要儀器
    2.2.4 敵百蟲對(duì)桔小實(shí)蠅的毒力測(cè)定
    2.2.5 喂食CF-BD后敏感品系桔小實(shí)蠅的抗藥性測(cè)定及菌落檢測(cè)
    2.2.6 去除CF-BD后抗性品系桔小實(shí)蠅的抗藥性測(cè)定及菌落檢測(cè)
    2.2.7 桔小實(shí)蠅成蟲腸道和內(nèi)生殖系統(tǒng)解剖
    2.2.8 熒光原位雜交（FISH）
    2.2.9 數(shù)據(jù)分析
2.3 結(jié)果與分析
    2.3.1 攝入CF-BD后敏感品系桔小實(shí)蠅的抗藥性增強(qiáng)
    2.3.2 去除CF-BD引起抗性品系桔小實(shí)蠅的抗藥性降低
    2.3.3 桔小實(shí)蠅成蟲內(nèi)生殖系統(tǒng)和腸道結(jié)構(gòu)觀察
    2.3.4 CF-BD在桔小實(shí)蠅腸道內(nèi)的定位
2.4 小結(jié) 3 CF-BD全基因組測(cè)序及降解敵百蟲機(jī)制研究
3.1 引言
3.2 材料與方法
    3.2.1 試驗(yàn)材料
    3.2.2 試劑
    3.2.3 主要儀器
    3.2.4 GC-MS鑒定敵百蟲的降解產(chǎn)物
    3.2.5 CF-BD基因組DNA提取
    3.2.6 CF-BD全基因組測(cè)序及注釋
    3.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定磷酸酶基因的表達(dá)
    3.2.8 數(shù)據(jù)分析
3.3 結(jié)果與分析
    3.3.1 CF-BD對(duì)敵百蟲的降解途徑
    3.3.2 CF-BD基因組分析及有機(jī)磷水解酶基因的篩選
    3.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定OPH相似基因的表達(dá)
3.4 小結(jié) 4 CF-BD在桔小實(shí)蠅田間種群中的分布及對(duì)寄主適合度的影響
4.1 引言
4.2 材料與方法
    4.2.1 試驗(yàn)材料
    4.2.2 試劑
    4.2.3 主要儀器
    4.2.4 桔小實(shí)蠅DNA提取
    4.2.5 不同田間種群桔小實(shí)蠅中CF-BD的PCR和熒光定量PCR的檢測(cè)
    4.2.6 敵百蟲對(duì)田間種群桔小實(shí)蠅的毒力測(cè)定
    4.2.7 CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅適合度的影響
    
4.2.7.1 桔小實(shí)蠅三個(gè)蟲態(tài)干重的測(cè)定
    
4.2.7.2 桔小實(shí)蠅成蟲繁殖力、壽命和后代F1性比的測(cè)定
    4.2.8 數(shù)據(jù)分析
4.3 結(jié)果與分析
    4.3.1 不同田間種群桔小實(shí)蠅中CF-BD的PCR和熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果
    4.3.2 田間種群桔小實(shí)蠅抗藥性與體內(nèi)CF-BD數(shù)量的相關(guān)性
    4.3.3 CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅適合度影響的測(cè)定結(jié)果
4.4 小結(jié)
    4.4.1 田間種群桔小實(shí)蠅抗敵百蟲能力與其體內(nèi)CF-BD含量的關(guān)系
    4.4.2 CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅適合度的影響 5 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的傳播途徑
5.1 引言
5.2 材料與方法
    5.2.1 試驗(yàn)材料
    5.2.2 試劑
    5.2.3 主要儀器
    5.2.4 桔小實(shí)蠅各蟲態(tài)DNA提取
    5.2.5 引物設(shè)計(jì)與巢式PCR擴(kuò)增
    5.2.6 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的垂直傳播研究
    
5.2.6.1 平板檢測(cè)卵帶菌的情況
    
5.2.6.2 飼喂鏈霉素的桔小實(shí)蠅所產(chǎn)卵帶菌檢測(cè)
    
5.2.6.3 桔小實(shí)蠅各蟲態(tài)帶菌檢測(cè)
    5.2.7 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的水平傳播研究
    
5.2.7.1 混合飼養(yǎng)后的幼蟲帶菌檢測(cè)
    
5.2.7.2 混合飼養(yǎng)后的成蟲帶菌檢測(cè)
    
5.2.7.3 交配過(guò)后成蟲內(nèi)生殖系統(tǒng)的帶菌檢測(cè)
    5.2.8 桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵后的番石榴細(xì)菌 16S rDNA meta測(cè)序
    
5.2.8.1 番石榴的處理以及其細(xì)菌的富集
    
5.2.8.2 細(xì)菌總DNA提取
    
5.2.8.3 細(xì)菌 16S rDNA擴(kuò)增和meta測(cè)序
    
5.2.8.4 生物信息學(xué)分析
    5.2.9 數(shù)據(jù)分析
5.3 結(jié)果與分析
    5.3.1 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的垂直傳播檢測(cè)結(jié)果
    5.3.2 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的水平傳播檢測(cè)結(jié)果
    5.3.3 桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵后的番石榴細(xì)菌 16S rDNA meta測(cè)序結(jié)果分析
5.4 小結(jié)
    5.4.1 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的垂直傳播
    5.4.2 CF-BD在桔小實(shí)蠅種群中的水平傳播
    5.4.3 桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵后番石榴細(xì)菌 16S rDNA meta測(cè)序 6 結(jié)論與討論
6.1 結(jié)論
6.2 討論
    6.2.1 CF-BD對(duì)桔小實(shí)蠅敵百蟲抗藥性及適合度的影響
    6.2.2 CF-BD提高桔小實(shí)蠅抗藥性及降解敵百蟲的機(jī)制
    6.2.3 CF-BD在桔小實(shí)蠅中的傳播途徑
6.3 本文研究的創(chuàng)新點(diǎn)
6.4 有待深入研究的內(nèi)容 致謝 參考文獻(xiàn) 附錄A 基因序列信息 附錄B


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]小菜蛾中腸微生物多樣性及其功能研究[D]. 夏曉峰.福建農(nóng)林大學(xué) 2014

碩士論文
[1]德國(guó)小蠊共生菌種群變化與抗藥性的關(guān)系[D]. 劉浩.山東師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3681182