香蕉（Musa spp.）為單子葉草本植物,屬于芭蕉科（Musaceae）芭蕉屬（Musa）,是僅位于水稻、小麥和玉米之后的第四大糧食作物,世界上鮮果消費(fèi)量和貿(mào)易量最大的熱帶水果之一。然而,黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）和香蕉束頂病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）病害大規(guī)模爆發(fā)和流行已成為限制香蕉大量生產(chǎn)的主要因素之一,也嚴(yán)重影響了香蕉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此本研究主要通過建立香蕉CMV和BBTV檢測的組織免疫印跡技術(shù)和明確這兩種病毒在巴西蕉不同部位及不同時間的相對含量變化兩方面內(nèi)容,為有效防控病害奠定基礎(chǔ)。本研究利用SYBR Green實時熒光定量PCR中的絕對定量技術(shù),對香蕉樣品葉片中的CMV和BBTV進(jìn)行了準(zhǔn)確的定量,確定CMV和BBTV實時熒光定量PCR反應(yīng)條件的合理性及檢測方法的可靠性;應(yīng)用CMV和BBTV的單克隆抗體,建立了快速檢測田間樣品的組織免疫印跡技術(shù)（Tissue blot immunobiding assay,TBIA）;明確了巴西蕉不同部位及不同季節(jié)CMV和BBTV的相對含量變化,結(jié)果如下:1、依據(jù)CMV... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫詞及英漢對照
1 前言
    1.1 香蕉病毒病害的概況
    1.2 香蕉CMV和BBTV兩種病毒的生理學(xué)特征及病理學(xué)特性
        1.2.1 黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）
        1.2.2 香蕉束頂病毒（Banana bunchy top virus，BBTV）
    1.3 分子生物學(xué)檢測
        1.3.1 實時熒光定量PCR技術(shù)
        1.3.2 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)
    1.4 血清學(xué)檢測技術(shù)
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及抗血清
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 數(shù)據(jù)分析
    2.2 實驗方法
        2.2.1 RNA提取用具的處理
        2.2.2 感染CMV病毒的香蕉葉片總RNA的抽提
        2.2.3 感染BBTV病毒的香蕉葉片總DN A的抽提
        2.2.4 實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.2.5 病毒CMV和BBTV的實時熒光定量
        2.2.6 LAMP（RT-LAMP）檢測
        2.2.7 組織免疫印跡檢測
        2.2.8 間接ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 香蕉葉片總DNA及RN A的抽提
    3.2 香蕉葉片CMV和BBTV含量的檢測
        3.2.1 CMV和BBTV標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        3.2.2 實時熒光定量PCR檢測體系的建立
        3.2.3 三個香蕉樣品葉片的CMV含量分析
        3.2.4 香蕉葉片的BBTV含量分析
    3.3 TBIA法和LAMP法檢測香蕉病株的靈敏度分析
        3.3.1 TBIA法一抗、二抗最適稀釋度選擇
        3.3.2 比較TBIA法和RT- LAMP法檢測香蕉CMV病株的靈敏度
        3.3.3 比較TBIA法和LAMP法檢測香蕉BBTV病株的靈敏度
    3.4 TBIA法檢測香蕉病株的穩(wěn)定性分析
        3.4.1 TBIA法檢測香蕉CMV病株的穩(wěn)定性分析
        3.4.2 TBIA法檢測香蕉BBTV病株的穩(wěn)定性分析
    3.5TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法田間樣品檢測效果評價
        3.5.1 比較TBIA法、RT- LAMP和RT-PCR法檢測CMV病株
        3.5.2 比較TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法檢測BBTV病株
    3.6 香蕉CMV和BBTV含量的變化
        3.6.1 香蕉不同部位CMV和BBTV的相對含量變化
        3.6.2 香蕉不同季節(jié)CMV和BBTV病毒的相對含量變化
4 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 香蕉葉片CMV和BBTV實時熒光定量PC R定量分析
        4.1.2 CMV和BBTV檢測方法的研究
        4.1.3 巴西蕉CMV和BBTV相對含量的變化分析
    4.2 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3665791