麗蠅蛹集金小蜂（Nasonia vitripennis）是重要衛(wèi)生害蟲蠅類的蛹期外寄生蜂,具有很高的特異性。其雌蜂將卵產(chǎn)在寄主蛹?xì)は?幼蟲取食寄主獲取營養(yǎng)。寄生蜂幼蟲在取食過程中會分泌唾液幫助取食,以保證成功發(fā)育。麗蠅蛹集金小蜂染色體數(shù)目少,在室內(nèi)一年四季均可繁殖,又比較容易飼養(yǎng),所以是理想的模式昆蟲之一。對其唾液在取食過程中發(fā)揮功能的研究不僅能為蠅類的防治開發(fā)新技術(shù),提供新思路,還會為今后深入研究天敵昆蟲唾液對寄主的影響機(jī)制提供很好的模型。本研究以麗蠅蛹集金小蜂和家蠅（Musca domestic）蛹為研究對象,對寄生蜂唾液中的兩種蛋白進(jìn)行分子特性分析及功能研究,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.幼蟲唾液蛋白乙醇脫氫酶NvAdh功能相關(guān)分析根據(jù)麗蠅蛹集金小蜂的基因組序列設(shè)計引物,克隆獲得了一個唾液蛋白乙醇脫氫酶基因的開放閱讀框全長,將其命名為NvAdh（an alcohol dehydrogenase secreted by Nasoniavitripennis salivary gland）。該基因編碼了 349個氨基酸序列,并且N端含有一段長為19個氨基酸殘基的信號肽序列。通過qPCR... 

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１信號肽預(yù)測圖??Ｃ值：剪切位點值；Ｓ值：信號肽值；Ｙ值：綜合Ｃ值和Ｓ值參數(shù)??

將ＮｖＡｄｈ的開放閱讀框去除信號肽后，克隆到原核表達(dá)載體ｐＣｏｌｄ?Ｉ?ＤＮＡ??上，轉(zhuǎn)化到原核表迗菌株ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，對麗蠅蛹集金小蜂ＮｖＡｄｈ蛋白進(jìn)行??原核表達(dá)。由圖２．３可以看出，重組ＮｖＡｄｈ蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá)，重組??蛋白的分子質(zhì)量約為４０?ｋＤａ，與預(yù)測的分子大�。ǎ常罚福�?ｋＤａ）相符。之后對該??重組蛋白進(jìn)行大量表達(dá)并制備抗體。??１２３４５６７８９?１０?Ｍ?ｋＤａ??－ｍ??一?一１００??ｍｔ?￣７０??—５５??？一３５??Ｉ！：??—１０??圖２．３?ＮｖＡｄｈ蛋白原核表達(dá)??Ｆｉｇ?２．３?Ｐｒｏｃａｒｙｏｔｉｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＮｖＡｄｈ??１：未誘導(dǎo)ＧＦＰ菌體的上清；２：未誘導(dǎo)ＧＦＰ菌體的沉淀；３：誘導(dǎo)ＧＦＰ菌體的上清；４：??誘導(dǎo)

固定ＮｖＡｄｈ的酶濃度為０．８?ｍｇ／ｍＬ，在ｐＨ值為８．０的條件下，１２?￣?５２?°Ｃ??范圍內(nèi)，選取了?１２、１８、２７、３２、３７、４２、４７及５２°Ｃ八個溫度進(jìn)行試驗，測得??乙醇脫氫酶ＮｖＡｄｈ的最適反應(yīng)溫度為３７?°Ｃ?（見圖２．６），在１２?°Ｃ？３７?°Ｃ的范圍??內(nèi)，隨著溫度的逐漸升高，ＮｖＡｄｈ的活性也隨之加強；在３７?°Ｃ？５２?°Ｃ的范圍內(nèi)，??隨著溫度的逐漸升高，ＮｖＡｄｈ的活性隨之減弱。??？??４３??


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