海藻糖是昆蟲血淋巴中最主要的糖類,在調(diào)控昆蟲生殖、生長發(fā)育和能量代謝中發(fā)揮著重要的作用。菜蛾盤絨繭蜂C.vestalis寄生小菜蛾P(guān).xylostella 后,寄主免疫能力下降,營養(yǎng)代謝紊亂,另外一個顯著的變化就是血淋巴中糖含量的改變。所以,本文就菜蛾盤絨繭蜂調(diào)控寄主海藻糖的糖代謝及其相關(guān)分子機制展開研究。首先檢測了菜蛾盤絨繭蜂寄生對小菜蛾血淋巴中海藻糖和葡萄糖含量的影響。然后克隆了小菜蛾海藻糖代謝通路上的6個酶的基因序列,通過定量PCR及RNAi發(fā)現(xiàn)了是通過升高合成關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄水平造成寄主寄生后海藻糖含量升高,酶活檢測表明寄生并沒有改變寄主海藻糖酶酶活。最后,用假寄生、顯微注射寄生因子等試驗證明了寄生早期的海藻糖含量升高是由于毒液發(fā)揮作用,且毒液通過提升PxHK的轉(zhuǎn)錄水平,從而發(fā)揮作用�，F(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下:1.以3齡中（3rd-Ⅱ）為菜蛾盤絨繭蜂寄生的起始點,按發(fā)育階段序列檢測了寄生后,寄主發(fā)育至3齡末（3rd-Ⅲ）、4齡初（4th-Ⅰ）、4齡中（4th-Ⅱ）、4齡末（4th-Ⅲ）時,小菜蛾體內(nèi)血淋巴中海藻糖及葡萄糖含量變化情況。結(jié)果表明當(dāng)寄生后寄主發(fā)育至3齡末時,和未寄生的寄主... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
前言
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 昆蟲體內(nèi)的糖代謝概述
        1.1 海藻糖概述
        1.2 昆蟲海藻糖代謝的研究進展
    2 生態(tài)因素對昆蟲糖代謝的影響
    3 昆蟲內(nèi)源激素對糖代謝的影響
        3.1 胰島素insulin對糖代謝的影響
        3.2 脂動激素AKH對糖代謝的影響
        3.3 保幼激素JH對糖代謝的影響
        3.4 蛻皮激素ecdysone對糖代謝的影響
    4 寄生對寄主糖代謝影響的研究概況
    5 RNAi在昆蟲糖代謝研究中的應(yīng)用
第二章 基本材料與方法
    1 基本實驗材料
        1.1 養(yǎng)蟲設(shè)備
        1.2 供試材料
    2 實驗儀器及軟件系統(tǒng)
        2.1 實驗儀器
        2.2 軟件系統(tǒng)
    3 常用實驗試劑及配制
        3.1 試劑盒
        3.2 其它試劑
    4 常用試劑的配制
        4.1 磷酸緩沖液PBS
        4.2 感受態(tài)大腸桿菌的制備
        4.3 培養(yǎng)基的制備
        4.4 瓊脂糖凝膠電泳相關(guān)試劑
    5 常規(guī)實驗方法
        5.1 TRIzol法提取總RNA
        5.2 cDNA第一鏈的合成
        5.3 PCR反應(yīng)
        5.4 瓊脂糖凝膠電泳及凝膠回收目的片段
        5.5 連接反應(yīng)
        5.6 轉(zhuǎn)化
        5.7 質(zhì)粒提取
        5.8 熒光定量PCR
第三章 菜蛾盤絨繭蜂寄生對小菜蛾血淋巴中糖含量的影響
    1. 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 實驗方法
        1.3 小菜蛾血淋巴中糖類化合物含量分析
        1.4 數(shù)據(jù)分析
    2. 結(jié)果與分析
        2.1 海藻糖與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.2 菜蛾盤絨繭蜂寄生對小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影響
        2.3 菜蛾盤絨繭蜂寄生對小菜蛾血淋巴中葡萄糖含量的影響
    3. 討論
第四章 小菜蛾糖代謝相關(guān)基因的克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 序列獲得
        1.3 生物信息學(xué)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PxGP序列分析
        2.2 PxPGM序列分析
        2.3 PxTPS序列分析
        2.4 PxHK序列分析
        2.5 PxTRET1序列分析
        2.6 PxTRE-2序列分析
    3 討論
第五章 寄生對小菜蛾海藻糖代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響及PxTPS功能驗證
    1 材料方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 實時熒光定量PCR檢測
        1.3 小菜蛾海藻糖酶酶活測定
        1.4 雙鏈合成
        1.5 dsRNA顯微注射
        1.6 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxGP轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.2 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxPGM轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.3 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxHK轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.4 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxTPS轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.5 菜蛾盤絨繭蜂寄生對各組織PxTPS轉(zhuǎn)錄的影響
        2.6 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxTRET1轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.7 菜蛾盤絨繭蜂寄生對PxTRE-2基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.8 菜蛾盤絨繭蜂寄生對小菜蛾海藻糖酶酶活的影響
        2.9 PxTPS RNAi的效果
        2.10 PxTPS RNAi對小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影響
    3 討論
第六章 寄生因子對小菜蛾血淋巴中海藻糖及PxHK轉(zhuǎn)錄水平的影響
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 實驗方法
        1.3 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 菜蛾盤絨繭蜂假寄生對小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影響
        2.2 CvBV、菜蛾盤絨繭蜂毒液對小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影響
        2.3 菜蛾盤絨繭蜂毒液對PxHK轉(zhuǎn)錄水平含量的影響
    3 討論
第七章 總討論
    1 結(jié)論與討論
    2 本文創(chuàng)新之處
    3 本文不足之處
    4 今后的研究方向
參考文獻
附錄
    教育經(jīng)歷
    碩士期間發(fā)表的文聿


【參考文獻】：
期刊論文
[1]昆蟲海藻糖及其合成酶基因的特性與功能研究進展[J]. 唐斌,徐青葉,趙麗娜,王世貴,張帆.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2014(06)
[2]寄生對越冬代菜粉蝶蛹血淋巴中蛋白質(zhì)和糖類代謝的影響[J]. 呂慧平,蔡峻,葉恭銀,徐紅星,胡萃.  浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2000(06)



本文編號：3650080