葡萄是世界上具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的栽培果樹,國內(nèi)外廣泛種植的品種主要為歐洲葡萄,歐洲葡萄果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良,而且加工產(chǎn)品豐富,其缺點(diǎn)是抗病性差,易受葡萄白粉病等真菌病害的影響。葡萄白粉病是一種生物營養(yǎng)型真菌,能侵染葡萄所有綠色組織,導(dǎo)致葡萄果實(shí)品質(zhì)下降和產(chǎn)量降低。挖掘葡萄抗病基因,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)來培育抗病性強(qiáng)、品質(zhì)優(yōu)良的葡萄新品種具有重要意義。課題組前期對葡萄WRKY轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了生物信息學(xué)分析以及抗病和感病葡萄在不同病原菌誘導(dǎo)下的差異基因表達(dá)分析,篩選出了白粉菌誘導(dǎo)顯著差異表達(dá)的VqWRKY56基因。本研究在此基礎(chǔ)上,從抗白粉病的中國野生毛葡萄‘商-24’中克隆VqWRKY56基因,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化易感病的歐洲葡萄無核白,開展VqWRKY56基因功能及其作用機(jī)制研究。主要研究結(jié)果如下:1.中國野生毛葡萄VqWRKY56基因克隆及其序列分析。VqWRKY56在抗病毛葡萄‘商-24’接種白粉菌后的表達(dá)分析結(jié)果表明,白粉菌誘導(dǎo)VqWRKY56基因顯著上調(diào)表達(dá),并在120 h時(shí)表達(dá)量最大;利用同源序列克隆得到VqWRKY56開放閱讀框,長度為1491 bp,編碼496個(gè)氨基酸殘基;VqWRKY56... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 葡萄白粉病介紹
    1.3 植物免疫系統(tǒng)
    1.4 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.4.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的概述
        1.4.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子植物中的研究進(jìn)展
        1.4.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在葡萄中的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 中國野生毛葡萄VqWRKY56基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化無核白
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體與菌株
        2.1.3 供試病原菌
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 葡萄葉片DNA、RNA的提取以及RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 VqWRKY56基因的克隆與過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 VqWRKY56轉(zhuǎn)化無核白
        2.2.4 VqWRKY56過量表達(dá)株系的鑒定
        2.2.5 VqWRKY56基因過量表達(dá)株系的擴(kuò)繁、煉苗
        2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 中國野生毛葡萄‘商-24’接種白粉菌后VqWRKY56的表達(dá)分析
        2.3.2 VqWRKY56基因的克隆與生物信息學(xué)分析
        2.3.3 VqWRKY56過表達(dá)載體的構(gòu)建與無核白胚性愈傷組織的誘導(dǎo)及遺傳轉(zhuǎn)化
        2.3.4 VqWRKY56過表達(dá)株系的鑒定
        2.3.5 VqWRKY56過表達(dá)株系的擴(kuò)繁與煉苗
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 中國野生毛葡萄VqWRKY56調(diào)控白粉病的功能鑒定
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 供試病原菌
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 接種葡萄白粉菌處理
        3.2.2 組織化學(xué)染色
        3.2.3 半定量分析抗病相關(guān)基因表達(dá)
        3.2.4 VqWRKY56酵母雙雜交BD載體的構(gòu)建
        3.2.5 VqWRKY56自激活檢測
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 葡萄VqWRKY56過表達(dá)株系和野生型株系接種白粉菌表型觀察
        3.3.2 細(xì)胞死亡和活性氧積累的染色觀察
        3.3.3 半定量分析防御相關(guān)基因的表達(dá)
        3.3.4 VqWRKY56酵母雙雜交BD載體的構(gòu)建
        3.3.5 VqWRKY56自激活檢測
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 附錄
附錄B 附錄
致謝
個(gè)人簡歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]葡萄WRKY家族基因的鑒定及VlWRKY58和VaWRKY10的功能分析[D]. 郭春磊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018



本文編號：3642930