噻蟲啉（thiacloprid）是拜耳公司開發(fā)的一種高效、低毒、廣譜的新煙堿類殺蟲劑,廣泛應(yīng)用于對刺吸式和咀嚼式口器害蟲的防治。目前關(guān)于噻蟲啉的檢測方法仍以高效液相色譜法（HPLC）為主,然而儀器檢測存在費用高、有機溶劑使用量大、操作程序復(fù)雜和難以實現(xiàn)高通量檢測等問題。本研究制備了高質(zhì)量噻蟲啉單克隆抗體,建立了基于噻蟲啉單克隆抗體的間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法（ic-ELISA）、熒光偏振免疫分析方法（FPIA）和上轉(zhuǎn)換熒光試紙條免疫層析分析方法（U-ICA）,研究結(jié)果表明,建立的三種免疫分析方法可以應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境樣品中噻蟲啉殘留的快速檢測。本研究利用實驗室制備的噻蟲啉半抗原,采用活潑酯法制備了噻蟲啉包被原,其偶聯(lián)結(jié)合比為14:1。使用實驗室已制備的噻蟲啉免疫原,分別采用常規(guī)免疫和快速佐劑免疫兩種方法對BALB/c雌性小白鼠進行免疫。實驗結(jié)果表明,常規(guī)免疫結(jié)果更理想,細(xì)胞融合后共得到了三株雜交瘤細(xì)胞株并最終篩選到一株可以穩(wěn)定分泌抗噻蟲啉單克隆抗體且靈敏度最高的雜交瘤細(xì)胞株,命名為C9。經(jīng)測定,所得到的單克隆抗體亞型為IgG2b型。利用制備的單克隆抗體建立了噻蟲啉ic-ELISA方法,并... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
緒論
第一章 文獻綜述
    1 農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀
        1.1 酶抑制法
        1.2 活體生物測定法
        1.3 免疫分析法
    2 農(nóng)藥殘留免疫分析方法現(xiàn)狀分析
        2.1 小分子化合物抗原制備研究進展
        2.2 小分子化合物抗體制備研究進展
        2.3 農(nóng)藥殘留免疫分析技術(shù)
    3 噻蟲啉殘留檢測研究進展
        3.1 理化性質(zhì)及毒理學(xué)數(shù)據(jù)
        3.2 噻蟲啉殘留檢測概況
    4 本研究的目的、意義及內(nèi)容
第二章 噻蟲啉單克隆抗體的制備
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料與儀器設(shè)備
        2.2 試驗方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 人工抗原偶聯(lián)結(jié)合比測定
        3.2 小鼠常規(guī)免疫與快速免疫血清效價比較及細(xì)胞株系的建立
        3.3 單克隆抗體亞型的鑒定
        3.4 抗體可變區(qū)序列的測定
    4 結(jié)論與討論
第三章 噻蟲啉IC-ELISA的建立
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料與儀器設(shè)備
        2.2 試驗方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 抗原、抗體工作濃度的確定
        3.2 工作緩沖液的優(yōu)化
        3.3 靈敏度
        3.4 特異性評價
        3.5 基質(zhì)效應(yīng)
        3.6 準(zhǔn)確性
        3.7 儀器相關(guān)性
    4 結(jié)論與討論
        4.1 靈敏度
        4.2 特異性
第四章 噻蟲啉熒光偏振免疫分析方法研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料與儀器設(shè)備
        2.2 試驗方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 熒光示蹤物鑒定
        3.2 FPIA工作緩沖液條件優(yōu)化
        3.3 靈敏度
        3.4 特異性
        3.5 準(zhǔn)確性
        3.6 儀器相關(guān)性
    4 結(jié)論與討論
第五章 噻蟲啉上轉(zhuǎn)換熒光試紙條免疫層析分析方法研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗材料與儀器設(shè)備
        2.2 試驗方法
    3 結(jié)果與討論
        3.1 UCNPs修飾前后的表征
        3.2 UCNPS試紙條的優(yōu)化
        3.3 UCNPs試紙條定量檢測噻蟲啉的標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.4 UCNPS試紙條檢測性能的評價
        3.5 儀器相關(guān)性
    4 結(jié)論與討論
全文總結(jié)
參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3640382