發(fā)布時(shí)間：2022-02-18 18:01

　　煙草是湖北省重要的經(jīng)濟(jì)作物,種植煙草是煙農(nóng)脫貧致富的重要途徑之一。近幾年來,湖北省煙區(qū)煙草赤星病發(fā)生嚴(yán)重,降低了煙草品質(zhì)和產(chǎn)量,影響了煙草種植業(yè)的發(fā)展。本研究通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)湖北省煙草赤星病的病原進(jìn)行鑒定,在此基礎(chǔ)上研究病原菌的生物學(xué)特性和遺傳多樣性,主要研究結(jié)果如下:從湖北省恩施、十堰、襄陽和宜昌4個(gè)產(chǎn)煙區(qū)煙草赤星病樣本上分離獲得72株鏈格孢菌,在致病性測(cè)定基礎(chǔ)上通過形態(tài)學(xué)和基于rDNA-ITS、Calmodulin和Plasma membraneATPase基因序列的分子輔助鑒定,證實(shí)引起湖北省煙草赤星病的病原菌為長柄鏈格孢（Alternaria longipes）、細(xì)極鏈格孢（Alternaria tenuissima）、鏈格孢（Alternaria alternata）和鴨梨鏈格孢（Alternaria yaliinficiens）。長柄鏈格孢和細(xì)極鏈格孢產(chǎn)孢鏈均為直鏈,少有分支,但長柄鏈格孢大部分孢子頂端常延伸成40⁷0μm長的假喙,而細(xì)極鏈格孢成熟分生孢子孢身中部有顏色加深的橫隔膜,且隘縮更明顯;鏈格孢和鴨梨鏈格孢產(chǎn)孢鏈都有大量分支;但鏈格... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 煙草赤星病
        1.1 煙草赤星病發(fā)生與危害
        1.2 煙草赤星病流行因素
    2 煙草赤星病病原的分類鑒定
        2.1 煙草赤星病病原種類
        2.2 鏈格孢菌的鑒定
            2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定
            2.2.2 分子鑒定
    3 煙草赤星病的生物學(xué)特性研究
        3.1 煙草赤星病致病機(jī)理
            3.1.1 致病相關(guān)毒素
            3.1.2 致病相關(guān)酶類
        3.2 煙草赤星病病原菌的致病力分化
        3.3 不同溫濕度、pH對(duì)煙草赤星病菌生長的影響
        3.4 不同氮源、碳源對(duì)煙草赤星病菌生長的影響
    4 煙草赤星病菌的遺傳多樣性的分子標(biāo)記
        4.1 限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)
        4.2 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)
        4.3 限制性擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)
        4.4 簡單重復(fù)序列(SSR)
        4.5 簡單重復(fù)序列區(qū)間(ISSR)
    5 研究的目的和意義
第二章 湖北省烤煙煙草赤星病病原鑒定
    1 材料和方法
        1.1 病害樣來源
        1.2 培養(yǎng)基及所用試劑
        1.3 病原菌的單孢分離與保存
        1.4 病原菌的致病性測(cè)定
        1.5 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定
        1.6 病原菌的分子鑒定
            1.6.1 供試菌株
            1.6.2 基因組DNA提取
            1.6.3 PCR反應(yīng)體系
            1.6.4 PCR引物序列以及反應(yīng)程序
            1.6.5 PCR反應(yīng)檢測(cè)
            1.6.6 PCR產(chǎn)物序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
    2 結(jié)果與分析
        2.1 湖北省煙草赤星病病原菌分離
        2.2 致病性測(cè)定
        2.3 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果
        2.4 病原菌的分子鑒定
            2.4.1 基于rDNA-ITS序列鑒定結(jié)果
            2.4.2 基于Calmodulin序列鑒定結(jié)果
            2.4.3 基于Plasma membrane ATPase序列鑒定結(jié)果
            2.4.4 基于三個(gè)基因序列綜合鑒定結(jié)果
        2.5 四種鏈格孢致病菌在湖北的地理分布
    3 小結(jié)和討論
第三章 湖北省煙草赤星病菌生物學(xué)特性研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試菌株
            1.1.2 供試植物
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 不同溫度條件對(duì)菌絲生長影響
            1.2.2 不同pH值對(duì)菌絲生長的影響
            1.2.3 不同碳源對(duì)菌絲生長影響
            1.2.4 不同氮源對(duì)菌絲生長影響
            1.2.5 不同種煙草赤星病病菌的致病力測(cè)定
            1.2.6 不同溫度對(duì)長柄鏈格孢致病力的影響
            1.2.7 不同保濕時(shí)間對(duì)長柄鏈格孢致病力的影響
            1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果
        2.1 不同溫度對(duì)4種鏈格孢菌菌絲生長的影響
        2.2 不同pH值對(duì)4種鏈格孢菌菌絲生長的影響
        2.3 不同碳源對(duì)4個(gè)種鏈格孢菌菌絲生長的影響
        2.4 不同氮源對(duì)4種鏈格孢菌菌絲生長的影響
        2.5 不同鏈格孢菌的致病力比較
        2.6 不同溫度對(duì)長柄鏈格孢菌致病力的影響
        2.7 不同保濕時(shí)間對(duì)長柄鏈格孢致病力的影響
    3 小結(jié)和討論
第四章 湖北省煙草赤星病長柄鏈格孢遺傳多樣性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試菌株
            1.1.2 試驗(yàn)儀器
        1.2 方法
            1.2.1 基因組DNA提取及檢測(cè)
            1.2.2 ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立
                1.2.2.1 PCR反應(yīng)體系
                1.2.2.2 ISSR-PCR擴(kuò)增程序
                1.2.2.3 引物的篩選及退火溫度的確定
            1.2.3 遺傳多樣性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果
        2.1 ISSR引物的篩選及退火溫度的確定
            2.1.1 引物的初次篩選及最佳退火溫度的確定
            2.1.2 引物的復(fù)篩
                2.1.2.1 基因組DNA濃度及純度檢測(cè)
                2.1.2.2 ISSR引物的復(fù)篩
        2.2 長柄鏈格孢菌菌株的遺傳多樣性分析
            2.2.1 長柄鏈格孢菌菌株的遺傳多態(tài)性
            2.2.2 長柄鏈格孢不同地理來源菌株的遺傳多樣性
            2.2.3 長柄鏈格孢不同地理種群的遺傳距離分析
            2.2.4 煙草長柄鏈格孢菌(A.longipes)ISSR聚類分析結(jié)果
    3 小結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[7]入侵植物紫莖澤蘭葉鏈格孢菌生物學(xué)多樣性研究[D]. 周振歆.云南大學(xué) 2010
[8]煙草赤星病菌角質(zhì)酶的純化、性質(zhì)及在致病中的作用研究[D]. 劉輝.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[9]重慶煙草赤星病菌的致病力分化及遺傳差異性研究[D]. 張世才.西南大學(xué) 2009
[10]大豆疫霉分子檢測(cè)及SSR標(biāo)記的開發(fā)[D]. 徐靜靜.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008



本文編號(hào)：3631295