香蕉細(xì)菌性軟腐病菌（DickeyazeaeMS3）為革蘭氏陰性細(xì)菌,其寄主范圍廣、能同時(shí)侵染單、雙子葉植物,在我國雖無頻繁報(bào)道,但在病害流行地區(qū)會造成較大損失,目前已被列為302號檢疫性有害生物,尤其近年來在廣東香蕉產(chǎn)區(qū)大規(guī)模爆發(fā),造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。病原細(xì)菌與寄主細(xì)胞之間存在著廣泛而復(fù)雜的信號交流,但這方面的研究剛剛開始。本項(xiàng)目以香蕉細(xì)菌性軟腐病菌D.zeae MS3為主要研究對象,研究病原菌多胺信號途徑在病原—寄主互作過程中的作用,重點(diǎn)研究多胺對病原菌重要毒力相關(guān)基因,包括重要致病因子、運(yùn)動性、生物膜形成和T3SS分泌系統(tǒng)的調(diào)控作用,同時(shí),根據(jù)T3SS效應(yīng)蛋白基因的表達(dá)情況,構(gòu)建特異性多胺檢測體系,揭示多胺信號應(yīng)答線索和調(diào)控網(wǎng)絡(luò),闡明香蕉軟腐菌的致病機(jī)理,從分子水平上認(rèn)識病原-寄主互作機(jī)制,為發(fā)展新型病害防控策略建立理論基礎(chǔ)。主要的研究結(jié)果如下:1、通過比對香蕉細(xì)菌性軟腐病菌D.zeae MS1基因組序列,預(yù)測得到MS1中與多胺合成途徑相關(guān)的基因4個(gè),分別為speA、speC、spe D和speE,并查找到4套與多胺轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的ABC transporter proteins（共16... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

多胺合成通路

具體的序列見附錄。另外，查找到 4 套與多胺轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的 ABC transporter proteins，如圖2.2 所示。一套完整的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)包括一個(gè) ABC transporter substract-binding protein、一個(gè) ATPase 和兩個(gè)內(nèi)膜蛋白。另外，在 MS3 中還查找到可特異性轉(zhuǎn)運(yùn)腐胺的兩個(gè)內(nèi)膜蛋白編碼基因，分別為 plaP 和 puuP。本研究對這 22 個(gè)基因進(jìn)行基因敲除（基因序列見附錄），明確多胺信號在病原菌致病過程中的作用。圖 2.2 香蕉軟腐菌 MS3 中 4 套多胺轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)2.4.2 MS3 基因組總 DNA 的提取與克隆載體的雙酶切香蕉軟腐菌 MS3 基因組含有一個(gè)大小約為 4.7 Mb 的染色體，不含質(zhì)粒 DNA。用EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit 提取 MS3 基因組 DNA 后溶于 ddH2O，吸取 5μL

凝膠成像系統(tǒng)觀察發(fā)現(xiàn)基因組總 DNA 無降解現(xiàn)象作為 MS3 基因組總 DNA 的 PCR 模板。得到的質(zhì)粒 pKNG101，使用 SpeI-HF 和 BamHI-HF 進(jìn)行雙酶切約為 360bp，37℃酶切 4 h。將提取得到的質(zhì)粒 pKNG101 與經(jīng)吸取 5μL 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳, 觀察發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒 pKNG101 雙酶B 所示）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)菌性軟腐病菌Dickeya致病機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 周佳暖,姜子德,張煉輝.  植物病理學(xué)報(bào). 2015(04)
[2]2011～2013年廣西香蕉病害記述[J]. 付崗,潘連富,杜嬋娟,晏衛(wèi)紅.  廣西植保. 2015(01)
[3]細(xì)菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 姚豐華,張鈺,朱國強(qiáng).  中國動物傳染病學(xué)報(bào). 2013(06)
[4]香蕉品種對香蕉細(xì)菌性軟腐病的抗性鑒定[J]. 蒲小明,林壁潤,呂順,沈會芳,周佳暖,周建坤,韓秀香.  植物保護(hù). 2012(03)
[5]香蕉的價(jià)值[J]. 張靜,劉菊華,徐碧玉,金志強(qiáng).  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(12)
[6]風(fēng)信子軟腐病病原的鑒定和殺菌劑試驗(yàn)[J]. 李冰,馬曉紅,沈強(qiáng),顧俊杰,史益敏.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2011(05)
[7]四株胡蘿卜軟腐歐文氏桿菌胡蘿卜亞種新菌株的分離鑒定[J]. 趙玲,柴兆祥,李金花,王蒂.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2011(04)
[8]我國甘薯新病害-莖腐病的研究初報(bào)[J]. 黃立飛,羅忠霞,房伯平,陳景益,張雄堅(jiān),王章英.  植物病理學(xué)報(bào). 2011(01)
[9]春羽細(xì)菌性軟腐病病原鑒定[J]. 陳永強(qiáng),李梅,牟登科,楊秀楷,曾大興.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(12)
[10]菊基腐病菌的常用檢測技術(shù)[J]. 黃艷霞.  西南林學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(S1)



本文編號：3625013