發(fā)布時(shí)間：2022-02-12 14:40

　　番木瓜（Carica papaya L.）廣泛種植于熱帶和亞熱帶地區(qū),番木瓜環(huán)斑病毒（Papayaringspot virus,PRSV）是主要的番木瓜病害,并嚴(yán)重制約著番木瓜產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。對(duì)于防治番木瓜環(huán)斑病最直接有效的措施是種植抗病品種。在番木瓜栽培品種尚未發(fā)現(xiàn)具有抗病性的品系,有些野生型品種具有抗性,但是由于存在生殖隔離無法通過雜交育種方法將抗性轉(zhuǎn)移到商業(yè)化種植的番木瓜品種中。由于PRSV存在地理株,目前轉(zhuǎn)基因番木瓜采用序列同源依賴抗病性,因此轉(zhuǎn)夏威夷或臺(tái)系灣PRSV外殼蛋白基因的品種只對(duì)夏威夷或臺(tái)灣的PRSV株系具有抗性。對(duì)于海南的PRSV株系進(jìn)行調(diào)查分析發(fā)現(xiàn),海南PRSV分離株與其他地區(qū)的株系差異性較大,迫切需要培養(yǎng)抗海南PRSV番木瓜新種質(zhì)。本研究中,根據(jù)RNAi策略利用海南PRSV-CP基因保守序列構(gòu)建抗海南番木瓜環(huán)斑病毒植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通過基因槍法將載體導(dǎo)入番木瓜的愈傷組織中,經(jīng)卡那霉素抗性篩選后再分化成為植株。進(jìn)而描述陽性轉(zhuǎn)化植株474株系的分子特征同時(shí)進(jìn)行抗病毒試驗(yàn)分析其抗病性。Southern分析和微滴數(shù)字P... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１番木瓜植株的不同性別類型

基于ＲＮＡｉ抗ＰＲＳＶ番木瓜株系的培育及其分子特征驗(yàn)證科植物；然而，Ｗ型株系（ＰＲＳＶ－Ｗ）在自然環(huán)境中僅能侵染葫蘆科番木瓜（Ｂａｕ?ｅｔ?ａ丨．，２００３）。ＰＲＳＶ已被證實(shí)還能侵染羅漢果??／／）（Ｌｉａｏｅｌａｔ．，?２００５；朱靜等，２０１４）。番木瓜環(huán)斑病毒在我國(guó)于１９５９報(bào)道（任佩瑜和范懷忠，１９６４），迄今為止ＰＲＳＶ已廣泛流行于世界產(chǎn)區(qū)，嚴(yán)重限制著番木瓜產(chǎn)業(yè)持續(xù)蓬勃的發(fā)展。因而，研制抗ＰＲＳＶ是防治ＰＲＳＶ最根本有效的途徑。??

圖４?ＲＮＡｉ作用機(jī)制??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＲＮＡｉ??１．２．２?ＲＮＡｉ?特點(diǎn)??ＲＮＡｉ是表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄水平上的基因沉默，內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄后不能生成成熟故以內(nèi)含子為靶向的基因干擾是無效果，其作用過程具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：??（１）特異性。根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)特異性的識(shí)別并降解同源的基因組轉(zhuǎn)ｍＲＮＡ，不影響非同源序列的ｍＲＮＡ。對(duì)于ｍＲＮＡ的同源性要求比較高，高作用效果越明顯，即使只有ｌｂｐ的改變或者錯(cuò)配都會(huì)大大降低ｓｉＲＮＡ的〇８１〇１１１１１１＾１１＜；３１１＾，６１３丨．，２００２），因而對(duì)病毒的突變很敏感。然而，有些病毒１對(duì)ｓｉＲＮＡ不敏感，可能原因是ＲＮＡ的構(gòu)象從而影響ＲＩＳＣ的識(shí)別。??（２）高效性。根據(jù)ＲＮＡｉ作用機(jī)制，ＲＮＡｉ過程一旦在細(xì)胞中啟動(dòng)，會(huì)應(yīng)的速度成倍的放大和擴(kuò)增信號(hào)，極少量的ｄｓＲＮＡ就可以達(dá)到基因沉默效類似生物催化酶反應(yīng)的高效的特性。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)ｌ－ｌ〇〇ｎｍｏｌ／Ｌ的ｄｓＲＮＡ對(duì)是一的Ｈｏｌｅｎ?ｅｔ?ａ丨．，２００２。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]番木瓜畸形花葉病毒檢測(cè)鑒定及侵染性克隆構(gòu)建與應(yīng)用[D]. 庹德財(cái).海南大學(xué) 2015
[2]RNAi調(diào)控玉米抗甘蔗花葉病毒和粗縮病毒的研究[D]. 甘德芳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]轉(zhuǎn)ScMV-CP基因甘蔗抗病的分子基礎(chǔ)及環(huán)境安全性評(píng)價(jià)[D]. 阮妙鴻.福建農(nóng)林大學(xué) 2007
[4]番木瓜花粉管轉(zhuǎn)基因技術(shù)及RNA介導(dǎo)廣譜抗病性的初步研究[D]. 魏軍亞.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[5]轉(zhuǎn)核酶基因、反義和正義CMV-CP基因番茄的抗黃瓜花葉病毒（CMV）研究[D]. 朱秋菊.中國(guó)科學(xué)院研究生院（植物研究所） 2005

碩士論文
[1]原核表達(dá)的dsRNA誘導(dǎo)番木瓜畸型花葉病毒抗性的研究[D]. 張濤.海南大學(xué) 2014
[2]石斛蘭文心蘭轉(zhuǎn)CyMV-CP、ORSV-CP基因研究[D]. 張振華.海南大學(xué) 2011
[3]蘭花轉(zhuǎn)CiDREB1、PeDREB2、CyMV-CP基因研究[D]. 王濤.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]廣東省番木瓜病原真菌鑒定及生物學(xué)特性研究[D]. 杜宜新.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3621902