微孢子蟲是一類專營細(xì)胞內(nèi)寄生的單細(xì)胞真核生物,具有廣泛的宿主域。家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）引起的家蠶微粒子病是蠶桑業(yè)中的重要病害之一,給蠶業(yè)生產(chǎn)帶來重大損失。近年來,宿主與病原體之間相互作用的研究已成為熱點(diǎn),家蠶作為家蠶微孢子蟲的宿主,其對微孢子蟲侵染的應(yīng)答反應(yīng)機(jī)制的研究有助于我們深入了解家蠶應(yīng)對病原入侵的策略。家蠶微孢子蟲作為家蠶的病原,其侵染機(jī)制一直受到人們的廣泛關(guān)注和研究,微孢子蟲的發(fā)芽過程作為侵染的重要一環(huán),對其研究具有重要意義。微孢子蟲內(nèi)滲透壓的增加是孢子發(fā)芽的先決條件,有報道認(rèn)為,微孢子蟲水通道蛋白和海藻糖酶有可能是促使微孢子蟲內(nèi)滲透壓增加的關(guān)鍵蛋白。因此,本論文就宿主家蠶細(xì)胞對微孢子蟲侵染應(yīng)答的蛋白質(zhì)組學(xué)和家蠶微孢子蟲海藻糖酶的功能開展研究,主要結(jié)果如下:1.基于iTRAQ技術(shù)家蠶微孢子蟲侵染BmN細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)分析利用家蠶微孢子蟲體外感染增值體系,以感染和未感染家蠶微孢子蟲的BmN細(xì)胞為研究材料,采用iTRAQ技術(shù)對感染組（6 h、12 h、24 h、48 h、96 h和8 d）和對照組的蛋白進(jìn)行同位素相對標(biāo)記和絕對定量,并利用GO和KEGG富集分... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

iTRAQ8-plex化學(xué)式Fig.2.1ChemicalformulaofiTRAQ8-plexiTRAQ基本實(shí)驗(yàn)流程（圖2.2）：

圖 2.2 iTRAQ 基本實(shí)驗(yàn)流程Fig. 2.2 Basic experimental process of iTRAQ本章的主要內(nèi)容就是通過同位素相對標(biāo)記與絕對定量技術(shù)（iTRAQ），以感染和未感染家蠶微孢子蟲的 BmN 細(xì)胞為研究對象，對感染前后的 BmN 細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)的比較，以期獲得家蠶微孢子蟲先天性免疫的關(guān)鍵蛋白以及相應(yīng)的應(yīng)答通路，從而揭示家蠶細(xì)胞對微孢子蟲侵染下的應(yīng)答反應(yīng)途徑和調(diào)控機(jī)制。2.2 材料與試劑2.2.1 主要材料與試劑家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis，Nb）、家蠶卵巢細(xì)胞系（BmN 細(xì)胞）由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所家蠶生理與病理研究室保存。本章研究中的 iTRAQ 實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜分析、GO 分析和 KEGG 分析部分由廣州輝駿生物科技有限公司完成。TC-100 干粉培養(yǎng)基 Applichem

接種后微孢子蟲在 BmN 細(xì)胞中不斷增殖，數(shù)量不斷增加，最后充滿整個細(xì)胞，并最終將細(xì)胞裂解（圖2.3）。通過本實(shí)驗(yàn)，我們獲得了蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)所需要的材料，為揭示家蠶細(xì)胞對微孢子蟲侵染下的應(yīng)答反應(yīng)途徑和調(diào)控機(jī)制準(zhǔn)備了物質(zhì)基礎(chǔ)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行做好了準(zhǔn)備。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]家蠶后部絲腺差異蛋白組學(xué)及microRNA表達(dá)譜研究[D]. 李季生.浙江大學(xué) 2012
[2]家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）孢壁蛋白SWP26的研究[D]. 李艷紅.西南大學(xué) 2008

碩士論文
[1]海洋細(xì)菌Zunongwangia sp.海藻糖酶酶學(xué)分析及體外定向進(jìn)化[D]. 程啟朋.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]微孢子蟲感染誘導(dǎo)的家蠶應(yīng)答反應(yīng)及對其免疫信號通路的激活[D]. 樂亞杰.江蘇科技大學(xué) 2015
[3]家蠶微孢子蟲檢測技術(shù)研究及藍(lán)葉蟲微孢子蟲RPB1基因克隆與分析[D]. 燕薇.江蘇科技大學(xué) 2014



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