發(fā)布時間：2022-01-21 09:32

　　蘋果樹腐爛病是由子囊菌黑腐皮殼屬真菌Valsa mali引起的蘋果樹枝干病害。該病在我國普遍發(fā)生,能引起蘋果樹主干、主枝皮層腐爛,乃至整株枯死,嚴(yán)重影響我國蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。蘋果樹腐爛病的研究已深入到分子層面,但其治病機理尚不完全明確。蘋果樹腐爛病能降解根皮苷產(chǎn)生有毒物質(zhì),這些有毒物質(zhì)能引起和樹皮自然感病一樣的腐爛癥狀,腐爛的組織內(nèi)有大量微生物定殖,這些微生物與腐爛病菌之間能發(fā)生水平基因轉(zhuǎn)移。本研究基于V.mali全基因組數(shù)據(jù),鑒定到糖苷類水解酶（GH）家族Ⅰ的1個乳糖根皮苷水解酶（LPH）基因Vmlph1,及兩個具有博來霉素抗性的水平轉(zhuǎn)移基因（HGT）Vmhgt14和Vmhgt32。明確這三個基因在蘋果樹腐爛病菌侵染和治病過程中的作用,為探究病菌的適應(yīng)機制及致病機理奠定基礎(chǔ)。本研究利用Double-joint PCR構(gòu)建基因敲除載體,結(jié)合PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化對目的基因進行敲除,通過PCR檢測及Southern Blot驗證單拷貝突變體,并對突變體進行研究,取得如下結(jié)果:1.經(jīng)PCR檢測及Southern Blot驗證,獲得Vmlph1基因的敲除突變體1個。與野生型菌株03-8相比,... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Vmlph1基因敲除突變體驗證Fig.2-1VerificationoftheVmlph1deletionmutant

14蘋果樹腐爛病菌一個根皮苷降解酶基因和兩個博來霉素抗性基因的功能研究圖2-2野生型03-8及各突變體在PDA培養(yǎng)基上的營養(yǎng)生長觀察與分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4產(chǎn)孢變化觀察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）條件下培養(yǎng)30d后，PDA和ABA培養(yǎng)基上野生型03-8和突變體菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培養(yǎng)基上野生型03-8菌株產(chǎn)生分生孢子器平均數(shù)量分別為313、340個，ΔVmlph1菌株產(chǎn)生分生孢子器平均數(shù)量分別為133、166個。與野生型03-8相比，突變體ΔVmlph1在PDA和ABA培養(yǎng)基上數(shù)量都顯著減少（圖2-3）。表明Vmlph1影響蘋果腐爛病菌分生孢子產(chǎn)生。圖2-3野生型03-8和突變體在PDA和ABA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢情況星號(*)表示顯著性差異（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力檢測野生型03-8與ΔVmlph1在葉片上侵染病斑平均直徑分別為20.70mm、16.10mm，在枝條上侵染病斑平均直徑分別為22.70mm、20.20mm。與野生型03-8相比，突變體ΔVmlph1致病力顯著降低，在葉片上致病力降低22.0%，在枝條上致病力降低11.0%（圖2-4）。表明Vmlph1基因影響病菌致病力。

14蘋果樹腐爛病菌一個根皮苷降解酶基因和兩個博來霉素抗性基因的功能研究圖2-2野生型03-8及各突變體在PDA培養(yǎng)基上的營養(yǎng)生長觀察與分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4產(chǎn)孢變化觀察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）條件下培養(yǎng)30d后，PDA和ABA培養(yǎng)基上野生型03-8和突變體菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培養(yǎng)基上野生型03-8菌株產(chǎn)生分生孢子器平均數(shù)量分別為313、340個，ΔVmlph1菌株產(chǎn)生分生孢子器平均數(shù)量分別為133、166個。與野生型03-8相比，突變體ΔVmlph1在PDA和ABA培養(yǎng)基上數(shù)量都顯著減少（圖2-3）。表明Vmlph1影響蘋果腐爛病菌分生孢子產(chǎn)生。圖2-3野生型03-8和突變體在PDA和ABA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢情況星號(*)表示顯著性差異（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力檢測野生型03-8與ΔVmlph1在葉片上侵染病斑平均直徑分別為20.70mm、16.10mm，在枝條上侵染病斑平均直徑分別為22.70mm、20.20mm。與野生型03-8相比，突變體ΔVmlph1致病力顯著降低，在葉片上致病力降低22.0%，在枝條上致病力降低11.0%（圖2-4）。表明Vmlph1基因影響病菌致病力。

【參考文獻】：
期刊論文
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[7]陜西渭北地區(qū)蘋果樹腐爛病發(fā)生情況調(diào)查[J]. 李正鵬,高小寧,杜戰(zhàn)濤,胡楊,康振生,黃麗麗.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2013(01)
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[9]中國蘋果樹腐爛病發(fā)生和防治情況調(diào)查[J]. 曹克強,國立耘,李保華,孫廣宇,陳漢杰.  植物保護. 2009(02)
[10]高效液相色譜法快速測定紅富士蘋果渣中的6種多酚[J]. 陳磊,楊建榮,黃雪松.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2008(08)

碩士論文
[1]蘋果樹腐爛病菌阿魏酸酯酶家族基因的克隆及其致病功能分析[D]. 許銘.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]蘋果樹腐爛病菌4個多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究[D]. 宋娜.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[3]陜西蘋果樹腐爛病菌不同分離株生物學(xué)特性及致病性研究[D]. 臧睿.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006



本文編號：3600016