發(fā)布時間：2022-01-14 07:06

　　黃瓜（Cucumis sativus）是我國重要的設(shè)施蔬菜作物之一,其營養(yǎng)價值豐富,經(jīng)濟價值較高,在豐富居民菜籃子、滿足蔬菜周年供應(yīng)、農(nóng)村致富及農(nóng)民增收中起著重要作用。但是近年來隨著耕作模式的調(diào)整及環(huán)境的變化黃瓜上的病毒病呈現(xiàn)多發(fā)常發(fā)態(tài)勢,給黃瓜作物安全生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的困擾。瓜類褪綠黃化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV）是一種侵染危害多種瓜類作物的粉虱傳植物病毒,該病毒自2010年傳入我國以來,給多個省市的甜瓜、西瓜、黃瓜等作物生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的損失。2016年,我們在對山東壽光等地黃瓜上病毒病進行調(diào)查時發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)攸S瓜上出現(xiàn)一種葉片表現(xiàn)黃化植株伴有輕微矮縮的病害,為明確其中伴隨的病毒種類,我們對田間采集病樣進行了分子檢測,結(jié)果從中檢測到了瓜類褪綠黃化病毒,進一步的CP基因克隆及序列分析也證實了這一結(jié)果,這是該病毒在山東侵染黃瓜的首次報道,山東一方面是我國重要的蔬菜生產(chǎn)基地,CCYV的發(fā)生可能會給當(dāng)?shù)攸S瓜生產(chǎn)造成嚴(yán)重的威脅,另一方面山東亦是全國重要的種苗基地,全國范圍的種苗調(diào)運極有可能進一步加劇CCYV在更大范圍的擴散蔓延,因此該病害在黃瓜上的... 

【文章來源】：長江大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CCYV病毒基因組結(jié)構(gòu)

2.2 結(jié)果與分析 2.2.1 病害田間癥狀 2016 年本研究在對山東省黃瓜病毒病進行調(diào)查時在壽光地區(qū)溫室種植的黃瓜上發(fā)現(xiàn)一種葉片表現(xiàn)黃化癥狀的病害，該病害在當(dāng)?shù)匕l(fā)生已較為普遍，常規(guī)棚室的發(fā)病率多在 3%～10%，重發(fā)棚室發(fā)病率超過 30%。病株田間表現(xiàn)癥狀為葉片發(fā)黃和矮化等。葉片主要表現(xiàn)為脈間黃化，葉脈仍綠。早期癥狀主要發(fā)生在中下部葉片，與缺素癥狀非常接近，后期整株都會表現(xiàn)明顯的黃化，同時植株會伴有矮化癥狀（圖 2.2.1），對黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)有較大影響。

22得基因組序列，將獲得的CCYV基因組序列與已公開的CCYV不同分離物及同屬其它病毒的基因組序列進行分析，序列多重比對、同源性分析等除新增軟件BioEdit之外，其余使用軟件同2.1.13。進化樹的可信度使用1000次自導(dǎo)復(fù)制驗證[91]。3.2結(jié)果與分析3.2.1CCYV基因組克隆策略鑒于CCYV基因組包含RNA1和RNA2兩條鏈：且每條鏈的長度都≥8kb，因此我們制定了分段克隆的策略：通過設(shè)計特異引物（8對），將兩條鏈各分成4個片段分別進行擴增和克隆，相鄰片段之間重疊部分序列（圖3.2.1），確保后續(xù)序列組裝的準(zhǔn)確，從而獲得整個基因組序列。圖3.2.1本研究中使用的CCYV片段的克隆策略Fig.3.2.1ThecloningstrategyforCCYVfragmentsusedinthisresearch3.2.2CCYV基因組分段克隆基于制定的分段法克隆基因組序列策略，CCYV編碼的兩條RNA鏈（RNA1和RNA2），每條鏈設(shè)計四對特異性引物（表3.1.4），使用8對引物分別進行PCR克隆，均能得到與目的片段大小一致的特異性條帶（圖3.2.2），經(jīng)兩次擴增以獲取濃度更高的目的片段，分別割膠回收目的條帶，將回收產(chǎn)物與PMD18-T進行過夜連接，經(jīng)轉(zhuǎn)化、菌落PCR篩癬酶切驗證等步驟，最終得到陽性克隆，經(jīng)分析公司測定序列準(zhǔn)確無誤后，通過將每條鏈的序列進行拼接組裝從而獲得CCYV山東黃瓜分離物兩條RNA鏈的全基因組序列信息。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3588052