大豆是世界上重要的糧食和油料作物,在其生長過程中感染的大豆花葉病是我國南方大豆最主要的葉部病害之一,不僅影響產(chǎn)量,而且能使籽粒發(fā)病形成褐斑,導致品質(zhì)下降,影響出口外銷�；谵D(zhuǎn)基因技術對大豆進行新型育種,用以提高植株對各類脅迫的抗性,在傳統(tǒng)育種途徑的協(xié)同下改善種質(zhì),同時獲得增強植物對抗病害的最佳方案,從而提高大豆的品質(zhì)和產(chǎn)量,促進我國大豆產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。促絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPK）級聯(lián)途徑是生物體內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)之一,具體通過三級激酶磷酸化方式進行信號轉(zhuǎn)導（MAPKKKs、MAPKKs、MAPKs）,參與植株生長發(fā)育幾乎各個過程以及生物脅迫和非生物脅迫的響應。本研究以大豆為材料,克隆得到一個隸屬MAPKKKs的基因,命名為GmMAPKKK。采取農(nóng)桿菌介導大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法將GmMAPKKK導入到天隆一號受體中得到轉(zhuǎn)基因T2代實驗材料。通過摩擦接種花葉病毒,進一步通過對基因表達模式及生物學功能鑒定等研究,得到以下實驗結果:（1）轉(zhuǎn)GmMAPKKK基因植株鑒定:獲得120株T2代生根苗,依次對其采取草丁膦涂抹法、bar試紙... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２病原菌、細菌等生物脅迫下激發(fā)ＭＡＰＫ級聯(lián)途徑的分子機制??Ｆｉｇ．?１．２?Ｐｌａｎｔ?ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?

＾圖２．１轉(zhuǎn)ＧｍＭ４尸基因重組表達載體ｐＢ７ＦＷＧ２．０??Ｆｉｇ．２．１?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ｐＢ７ＦＷＧ２．０?ｆｏｒ?ＧｍＭＡＰＫＫＫ?ｇｅｎｅ．??２．１．２實驗試劑??

?２．３．２?６仰試紙條檢測法鑒定�。泊D(zhuǎn)尸？Ｃ基因植株結果??試紙條檢測結果如圖２．３所示，Ｔ２代非轉(zhuǎn)基因植株ＣＫ的測試線不顯??現(xiàn)紅色，僅顯示一條對照線，由此說明該植株中不含蛋白；對經(jīng)草丁膦初步??篩檢測顯示陽性的１０２株轉(zhuǎn)基因植株再進行以ｒ試紙條測定，結果顯示，對照線??和測試線均呈現(xiàn)紅色，表明均為陽性植株。??ＣＫ?１?２?３?４?５?６?７??８－?ｋＭＭＭ??＿圈??，，葡??Ｉ?＾?｜??Ｍ??圖２．?３?Ｔ２代轉(zhuǎn)ＧｗＭ＾ａＡ：基因大豆植株６ａ／■試紙條襝測結果。丨－７表示７個獨立的轉(zhuǎn)基因??株系的陽性植株；ＣＫ為非轉(zhuǎn)基因植株。??Ｆｉｇ?．２．３?Ｓｅｖｅｎ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?Ｔ２?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｌｉｎｅｓ?（１－７）?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ?ＣＫ?ｗｅｒｅ??ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｆｏｒ?ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｂａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｑｕｉｃｋ?ｄｉｐ?ｓｔｒｉｐ．??２．３．３?ＰＣＲ檢測法鑒定Ｔ２代轉(zhuǎn)基因植株結果??ＰＣＲ檢測結果如圖２．４顯示，非轉(zhuǎn)基因植株（ＣＫ）?ＤＮＡ擴增結果顯示沒有相??應的Ｚｗ基因目的條帶（４３６?ｂｐ），？而丨０２株Ｔ２代轉(zhuǎn)基因植株ＤＮＡ擴增產(chǎn)物中均??能檢測到目的條帶，為陽性植株。??Ｍ?＋?ＣＫ１２３４?５?６?７??圖２．３?�。泊D(zhuǎn)基因大豆植株ＰＣＲ檢測結果。１－７表示７個獨立的


本文編號：3579919