綠僵菌素（destruxin）是金龜子綠僵菌Metarhizium anisopliae產(chǎn)生的一種環(huán)縮肽類(lèi)化合物,綠僵菌素A（DA）是最常見(jiàn)的一種綠僵菌素同系物,具有殺蟲(chóng)活性,能抑制昆蟲(chóng)先天性免疫作用,但其分子水平的作用機(jī)制仍不清楚。本課題組在前期研究中,利用DA處理家蠶Bombyx mori Bm12細(xì)胞后,提取總蛋白質(zhì),再用蛋白酶降解,再通過(guò)電泳分離了特異性條帶,經(jīng)質(zhì)譜鑒定該條帶中包5種熱休克蛋白（heat shock proteins,HSP）（BmHSP70,BmHSP75,BmHSP90,BmHSCP,BmHSP97）,疑似它們與DA存在互作關(guān)系。因此,本研究擬構(gòu)建這5種家蠶熱休克蛋白的原核表達(dá)系統(tǒng),通過(guò)鎳親和層析分離純化目標(biāo)蛋白,然后采用生物膜干涉（Bio-Layer Interferometry,BLI）技術(shù)分析這些熱休克蛋白與DA的親和力,最后通過(guò)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）技術(shù)對(duì)DA處理家蠶Bm12細(xì)胞后上述熱休克蛋白基因表達(dá)量進(jìn)行定量分析,驗(yàn)證其是否為DA的結(jié)合蛋白。本文研究結(jié)果將為闡明DA作用的分子機(jī)理提供參考。... 

【文章來(lái)源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

綠僵菌素A(destruxinA)的結(jié)構(gòu)式

圖2.1生物膜干涉技術(shù)原理圖2.3.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑耗材1）Fortebio OctetK2 system（Pall OctetCorp., Menlo Park，CA）2）Assaybuffer：PBS(pH 7.4)+0.05% Tween‐203）StreptavidinSensors（ForteBio, part no. 18‐5019）4）Ligand（固化物）and Analyte（分析物）5）96‐well, flat bottom, black polypropylene microplates(Greiner Bio‐One part no5209)2.3.2 傳感器偶聯(lián)待測(cè)樣品聯(lián)樣品為BmHSP75、BmHSP90 及 BmHSP70

生物傳感器與蛋白樣品偶聯(lián)示意圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]綠僵菌素對(duì)四種昆蟲(chóng)細(xì)胞的毒性[J]. 何廣位,胡維娜,胡瓊波.  應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2015(06)
[2]金龜子綠僵菌及其粗毒素對(duì)樟巢螟幼蟲(chóng)的致病性[J]. 童應(yīng)華,李萬(wàn)里,馬淑娟.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2014(04)
[3]HSV-2gD、gBCTL表位及Hsp70融合DNA疫苗的免疫效果觀察[J]. 焦鳳萍,王玉,于愛(ài)蓮,田兆菊,李冬,趙興民.  免疫學(xué)雜志. 2013(11)
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[5]綠僵菌素的研究進(jìn)展[J]. 胡瓊波,任順祥.  中國(guó)生物防治. 2004(04)



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