Bt Cry1類毒素是由蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis,簡稱Bt）在產孢過程中產生,并對鱗翅目昆蟲幼蟲有殺蟲活性的一類毒素,主要包括Cry1Aa,Cry1Ab,Cry1Ac,Cry1B,Cry1C,Cry1E和Cry1F等。因為哺乳動物體內缺少毒素的受體,通常情況下認為Cry毒素對人類和家畜是無毒的,所以Bt基因被廣泛的應用于轉基因作物中,如玉米、大豆和土豆等。但隨著轉基因作物種植面積的逐年擴大,Bt基因抗蟲植物開始作為人類食物及動物飼料應用,人們對它的環(huán)境生態(tài)安全性以及其對人類和其它哺乳動物的安全隱患的擔憂逐漸增加。因此,對轉Bt基因作物Cry毒素的表達量和食品中的殘留量需要建立靈敏、可靠、方便的檢測方法。本論文依托成熟的單克隆抗體制備、基因工程和噬菌體展示技術制備Bt Cry1類毒素的單克隆抗體和單鏈抗體,并對獲得的抗體材料進行活性分析,建立Cry1類毒素的免疫學檢測方法,將其應用于實際樣品的檢測當中。主要內容包括以下幾個方面:1.抗Bt Cry1類毒素廣譜單克隆抗體的制備及檢測方法的建立通過比較七種 Cry1 類毒素（Cry1Aa,Cry1Ab,Cr... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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圖１－１抗體及其片段的基本結構??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ??

胞易于在體外無限增殖的特性，??又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細胞培??養(yǎng)，可形成單細胞系，即單克攏利用培養(yǎng)或小鼠腹腔接種的方法，便能得到大量??的、高濃度的、非常均一的抗體，稱為單克隆抗體，其結構、氨基酸順序、特異性??等都是一致的，而且在培養(yǎng)過程中，只要沒有變異，不同時間所分泌的抗體都能保??持同樣的結構與機能。這種技術即稱為單克隆抗體技術。這項新技術從根本上解決??了在抗體制備過程中長期存在的特異性和可重復性問題。單克隆抗體的制備流程如??圖１－２所示，首先選擇合適的動物（常用小鼠，近年來也有用大白兔制備單克隆抗??體的報道）進行免疫；中間取血清測定效價，當效價達到理想值時，拉頸處死小鼠，??取脾臟制備脾細胞并與生長狀態(tài)良好的骨髓瘤細胞ＳＰ２／０進行融合；對融合成功的??雜交瘤細胞進行亞克隆鑒定，篩選出能夠特異性分泌單一抗體的雜交瘤細胞株。??廳＿?體外培養(yǎng)??￣ｉ?「、培養(yǎng)液??０?１?是取??選擇培養(yǎng)??亞克隆篩選總?（兒人??—？?〇＞?？??？?６＇?—？??？?＆?＾?＆?單克隆抗體??－一?＿?ｆｔ?＾?Ａ?纟日＿合?單雜纟０＿?／ＣｉＶＷＢ．??骨髓瘤細胞ＳＰ２０??圖１－２單克隆抗體制備流程??Ｆｉｇ．?１－２?Ｇｅｎｅｒａｌ?ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｏｆ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ??２．２．２．２多克隆抗體??抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個Ｂ??淋巴細胞接受該抗原所產生的抗體稱之為單克隆抗體，而由多種抗原決定簇刺激機??體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，

前轉基因產品檢測中最常用的檢測方法是雙抗夾心ＥＬＩＳＡ法，包括商品??化的轉基因作物檢測試劑盒，一般也是采用雙抗夾心ＥＬＩＳＡ。??（ａ）直接法：以包被抗原：為例??、＾?洗滌?、一加酶底物??抗原包被酶標板加酸標記抗體?顯色??（ｂ）間接法??洗滌洗滌?加酶底物??抗原包被醜標板?加待檢抗體?加酶標記二抗?顯色??（ｃ）雙抗體夾心法：以直接夾心法為例??洗綠?洗潘＾加酶底物??Ｗ?＾￣Ｗ?＊?剛?＾?國??抗體包被酶標板?加待檢抗原?加酶標記二抗?顯色??圖１－３?ＥＬＩＳＡ法示意圖??Ｆｉｇ．?１－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＥＬＩＳＡ??２．２．４．３膠體金免疫層析試紙條??膠體金免疫層析分析（Ｇｏｌｄ?ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ａｓｓａｙ，?ＧＩＣＡ）是在?ＥＬＩＳＡ??方法基礎上發(fā)展起來的一種新型快速免疫測定技術。該方法以ＮＣ膜為固相載體，??待檢溶液通過層析作用橫向流動，只需將待檢溶液加在免疫層析條的樣品墊上即可，??不需要任何其他試劑和操作。該方法與傳統(tǒng)的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ等檢測方法相??１３??

【參考文獻】：
期刊論文
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