發(fā)布時(shí)間：2022-01-07 17:12

　　Bt Cry1類毒素是由蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱Bt）在產(chǎn)孢過程中產(chǎn)生,并對(duì)鱗翅目昆蟲幼蟲有殺蟲活性的一類毒素,主要包括Cry1Aa,Cry1Ab,Cry1Ac,Cry1B,Cry1C,Cry1E和Cry1F等。因?yàn)椴溉閯?dòng)物體內(nèi)缺少毒素的受體,通常情況下認(rèn)為Cry毒素對(duì)人類和家畜是無毒的,所以Bt基因被廣泛的應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物中,如玉米、大豆和土豆等。但隨著轉(zhuǎn)基因作物種植面積的逐年擴(kuò)大,Bt基因抗蟲植物開始作為人類食物及動(dòng)物飼料應(yīng)用,人們對(duì)它的環(huán)境生態(tài)安全性以及其對(duì)人類和其它哺乳動(dòng)物的安全隱患的擔(dān)憂逐漸增加。因此,對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因作物Cry毒素的表達(dá)量和食品中的殘留量需要建立靈敏、可靠、方便的檢測(cè)方法。本論文依托成熟的單克隆抗體制備、基因工程和噬菌體展示技術(shù)制備Bt Cry1類毒素的單克隆抗體和單鏈抗體,并對(duì)獲得的抗體材料進(jìn)行活性分析,建立Cry1類毒素的免疫學(xué)檢測(cè)方法,將其應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測(cè)當(dāng)中。主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面:1.抗Bt Cry1類毒素廣譜單克隆抗體的制備及檢測(cè)方法的建立通過比較七種 Cry1 類毒素（Cry1Aa,Cry1Ab,Cr... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：172 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１抗體及其片段的基本結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ??

胞易于在體外無限增殖的特性，??又具有抗體形成細(xì)胞的合成和分泌特異性抗體的特點(diǎn)。將這種雜交瘤作單個(gè)細(xì)胞培??養(yǎng)，可形成單細(xì)胞系，即單克攏利用培養(yǎng)或小鼠腹腔接種的方法，便能得到大量??的、高濃度的、非常均一的抗體，稱為單克隆抗體，其結(jié)構(gòu)、氨基酸順序、特異性??等都是一致的，而且在培養(yǎng)過程中，只要沒有變異，不同時(shí)間所分泌的抗體都能保??持同樣的結(jié)構(gòu)與機(jī)能。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。這項(xiàng)新技術(shù)從根本上解決??了在抗體制備過程中長(zhǎng)期存在的特異性和可重復(fù)性問題。單克隆抗體的制備流程如??圖１－２所示，首先選擇合適的動(dòng)物（常用小鼠，近年來也有用大白兔制備單克隆抗??體的報(bào)道）進(jìn)行免疫；中間取血清測(cè)定效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到理想值時(shí)，拉頸處死小鼠，??取脾臟制備脾細(xì)胞并與生長(zhǎng)狀態(tài)良好的骨髓瘤細(xì)胞ＳＰ２／０進(jìn)行融合；對(duì)融合成功的??雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行亞克隆鑒定，篩選出能夠特異性分泌單一抗體的雜交瘤細(xì)胞株。??廳＿?體外培養(yǎng)??￣ｉ?「、培養(yǎng)液??０?１?是取??選擇培養(yǎng)??亞克隆篩選總?（兒人??—？?〇＞?？??？?６＇?—？??？?＆?＾?＆?單克隆抗體??－一?＿?ｆｔ?＾?Ａ?纟日＿合?單雜纟０＿?／ＣｉＶＷＢ．??骨髓瘤細(xì)胞ＳＰ２０??圖１－２單克隆抗體制備流程??Ｆｉｇ．?１－２?Ｇｅｎｅｒａｌ?ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｏｆ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ??２．２．２．２多克隆抗體??抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)Ｂ??淋巴細(xì)胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體，而由多種抗原決定簇刺激機(jī)??體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，

前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)中最常用的檢測(cè)方法是雙抗夾心ＥＬＩＳＡ法，包括商品??化的轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)試劑盒，一般也是采用雙抗夾心ＥＬＩＳＡ。??（ａ）直接法：以包被抗原：為例??、＾?洗滌?、一加酶底物??抗原包被酶標(biāo)板加酸標(biāo)記抗體?顯色??（ｂ）間接法??洗滌洗滌?加酶底物??抗原包被醜標(biāo)板?加待檢抗體?加酶標(biāo)記二抗?顯色??（ｃ）雙抗體夾心法：以直接夾心法為例??洗綠?洗潘＾加酶底物??Ｗ?＾￣Ｗ?＊?剛?＾?國??抗體包被酶標(biāo)板?加待檢抗原?加酶標(biāo)記二抗?顯色??圖１－３?ＥＬＩＳＡ法示意圖??Ｆｉｇ．?１－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＥＬＩＳＡ??２．２．４．３膠體金免疫層析試紙條??膠體金免疫層析分析（Ｇｏｌｄ?ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ａｓｓａｙ，?ＧＩＣＡ）是在?ＥＬＩＳＡ??方法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型快速免疫測(cè)定技術(shù)。該方法以ＮＣ膜為固相載體，??待檢溶液通過層析作用橫向流動(dòng)，只需將待檢溶液加在免疫層析條的樣品墊上即可，??不需要任何其他試劑和操作。該方法與傳統(tǒng)的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ等檢測(cè)方法相??１３??

【參考文獻(xiàn)】：
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