目前,人們主要通過使用化學(xué)肥料和化學(xué)農(nóng)藥來提高農(nóng)作物的產(chǎn)量,然而其存在很多不利的影響,如效果不持久、土壤環(huán)境污染等。通過施用微生物肥料和生防制劑來替代化肥、農(nóng)藥,可以改善化肥和化學(xué)農(nóng)藥帶來的危害,實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。內(nèi)生細(xì)菌是生活于健康植物的各種組織和器官中,而不引起宿主植物任何疾病的一類微生物。內(nèi)生細(xì)菌具有促進(jìn)植物生長的作用,利用其促生作用來開發(fā)微生物菌肥和生防制劑,在農(nóng)業(yè)方面具有重大的研究意義。本研究以藥用植物木豆為材料,采用梯度稀釋涂板法對木豆內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離,并結(jié)合形態(tài)觀察和16S rRNA序列分析方法對其鑒定;采用Salkowski 比色法,鉬銻抗比色法,CAS檢測法等方法對木豆內(nèi)生細(xì)菌分泌植物生長素（IAA）,磷酸鹽增溶,產(chǎn)鐵載體等體外促生活性進(jìn)行研究;利用平板抑制試驗(yàn)對菌株抗病活性進(jìn)行研究并利用PCR和Voges-Proskauer法進(jìn)一步驗(yàn)證菌株的抗菌和促生機(jī)制;通過盆栽試驗(yàn),驗(yàn)證促生菌株對小麥幼苗的促生作用。研究結(jié)果如下:1.以木豆根、莖、葉為材料,將不同梯度的組織稀釋涂布于NA、LB和TSA 3種培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng),傳代和純化,最終獲得純化菌株54株。其中從NA... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１培養(yǎng)基種類對內(nèi)生細(xì)菌分離數(shù)量的影響??Ｆｕｒｅ?２－１?Ｅｆｆｅｃｔｏｍｅｄｉａ?ｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｅｎｄｏｅｎｏｕｓ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｓｏｌａｔｅｄ??

?２內(nèi)生細(xì)菌的分離、鑒定及促生抗菌活性研究???Ｍ?１?２?３??■??２０００ｂｐ＾＾＾ＶＳ??１?ＯＯＯｂｐ?■?ｒ?１１，?ｉ??圖２－５?ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３菌株的ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖??（Ｍ－標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記，１－３：?ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＾?ＢＥ－Ｒ２，?ＢＥ－Ｌ３??（Ｍ－ｓｔａｎｄａｒｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ，?１－３：?ＢＥ－Ｒ４，?ＢＥ－Ｒ２，?ＢＥ－Ｌ３?）??將純化后的ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行測序獲得基因序列，與ＢＬＡＳＴ數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較，找到其??同源序列，如表２－５。然后選取親緣關(guān)系較近的序列進(jìn)行對比，通過ＭＥＧＡ６鄰接法構(gòu)??建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖２－６所示。從圖２－６的試驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，ＢＥ－Ｒ４與５ａｃ／／／ｗ?？??的支持率高達(dá)１００％，結(jié)合其菌株的形態(tài)特征，分析確定內(nèi)生細(xì)菌ＢＥ－Ｒ４為枯草芽孢桿??菌ＢＥ－Ｒ２與／＾￡１＾〇？５〇？（２？／７以／＜如的支持率高達(dá)１００％，結(jié)合其菌株的??形態(tài)特征，分析確定內(nèi)生細(xì)菌?ＢＥ－Ｒ２?為?Ｐｓｅｗｔ／ｏｍｃｗｏｓ＇ｐｗｎＶ／ａ；?ＢＥ－Ｌ３?與??的支持率高達(dá)１００％，結(jié)合其菌株的形態(tài)特征，分析確定內(nèi)生細(xì)菌ＢＥ－Ｌ３為??Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ。??表２－５內(nèi)生細(xì)菌ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３序列和與其相近的Ｇｅｎｂａｎｋ序列??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＞?ＢＥ－Ｒ２＞?ＢＥ－Ｌ３

ｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ?ＪＱ７９５７８９??１００???ＢＥ－Ｌ３??Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ?ＡＰ０１９６３０??Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ?ｐｕｔｉｄａ?ＫＰ７６２５６６???ＢＥ－Ｒ２??１００??Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ?ｐｕｔｉｄａ?ＦＪ２６２３６８??＾ａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ?ＫＵ９０４２９７????—??—Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ?ＭＫ３９２０４３??１００??ＢＥ－Ｒ４??Ｉ?１??０．０２０??圖２－６ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３的菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＞?ＢＥ－Ｒ２＞?ＢＥ－Ｌ３??２．５本章小結(jié)??本章利用梯度稀釋涂板法，采用已經(jīng)報(bào)道的常用于分離植物內(nèi)生細(xì)菌的ＮＡ、ＬＢ、??ＴＳＡ培養(yǎng)基對木豆根、葉、莖中的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定。首次從木豆根、葉、莖中分??離得到５４株內(nèi)生細(xì)菌。其中，從ＮＡ培養(yǎng)基中分離得到２０株內(nèi)生細(xì)菌，從ＬＢ和ＴＳＡ??培養(yǎng)基中分別分離得到１８和１６株內(nèi)生細(xì)菌；在木豆根中發(fā)現(xiàn)３４株內(nèi)生細(xì)菌，在葉中??莖中分別發(fā)現(xiàn)１５和５株內(nèi)生細(xì)菌。本試驗(yàn)通過對內(nèi)生細(xì)菌的菌落大孝顏色和邊緣進(jìn)??行初步篩選，并結(jié)合《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》的分析，將得到５４株內(nèi)生細(xì)菌歸類為三??種菌屬：假單孢菌屬ｓｐ．），腸桿菌屬ｓｐ．），芽孢桿菌屬??ｓｐ．）。并通過分子生物學(xué)鑒定法，篩選得到假單抱菌屬ｓｐ．），??腸桿菌屬（￡＞？如ｓｐ．），芽孢桿菌屬（ＳａｃｖＹ／ｚｗ?ｓｐ．）的代表性菌株，分別為８￡－??Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３。并通過１６Ｓ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3570145