獼猴桃潰瘍病是一種嚴(yán)重危害獼猴桃生長的細(xì)菌性病害,其主要的致病菌為丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)。由于病原菌自身的變異、相互間的基因交流、外界環(huán)境的影響以及寄主的相互作用等因素導(dǎo)致病原菌的遺傳信息發(fā)生變化,使病害的流行及控制變得更為復(fù)雜。四川省作為獼猴桃種植大省,面臨著潰瘍病更為流行及蔓延的形勢。本研究針對獼猴桃主要產(chǎn)區(qū)的獼猴桃潰瘍病菌進(jìn)行分離鑒定,進(jìn)而研究其遺傳多樣性,主要結(jié)論如下。(1)本研究首次從廣元、成都、邛崍、雅安等獼猴桃主要產(chǎn)區(qū)采集疑似獼猴桃潰瘍病樣品142份,通過分離培養(yǎng)鑒定獲得77個Psa菌株,和3個假單胞屬菌株(Pseudomonas),不同病原菌形態(tài)具有細(xì)微差異。(2)通過BOX-PCR和EIRC-PCR對80個菌株進(jìn)行了遺傳多樣性分析。在相似系數(shù)分別為0.631和0.661時,兩種方法均將80個菌株聚為6類,聚類結(jié)果與菌株地理分布呈一定相關(guān)性。(3)通過對11個VNTR位點的多態(tài)性分析表明,1個為輕微變異位點,5個為中度變異位點,5個為高度變異位點,在相似系數(shù)為0.778時,該方法將80...

【文章來源】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 文獻(xiàn)綜述
        1.1.1 獼猴桃潰瘍病研究現(xiàn)狀
        1.1.2 獼猴桃潰瘍病病原菌的研究概況
        1.1.3 獼猴桃潰瘍病群體遺傳多樣研究
        1.1.4 遺傳變異研究方法
        1.1.5 獼猴桃潰瘍病病原菌致病性測定研究
    1.2 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 菌株采集
    2.2 技術(shù)路線
    2.3 試驗試劑與儀器
        2.3.1 試驗試劑
        2.3.2 試驗儀器
    2.4 試驗方法
        2.4.1 病原細(xì)菌的分離培養(yǎng)
        2.4.2 單菌落PCR
        2.4.3 病原菌的純化及DNA提取
        2.4.4 BOX-PCR和EIRC-PCR擴增
        2.4.5 MLVA的分子分型研究
        2.4.6 遺傳變異分析
        2.4.7 代表性菌株的致病性測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 樣品采集
    3.2 獼猴桃潰瘍病菌的分離培養(yǎng)及分子鑒定
        3.2.1 獼猴桃潰瘍病菌的分離培養(yǎng)
        3.2.2 分子鑒定
    3.3 基于BOX-PCR和EIRC-PCR的遺傳多樣性分析
        3.3.1 BOX-PCR擴增結(jié)果
        3.3.2 EIRC-PCR擴增結(jié)果
    3.4 MLVA分子分型研究
        3.4.1 VNTR多態(tài)性位點篩選
        3.4.2 毛細(xì)管電泳結(jié)果
        3.4.3 VNTR多態(tài)性位點的多態(tài)性信息含量分析及PIC值計算
        3.4.4 UPGMA聚類分析
    3.5 基于持家基因序列的遺傳變異分析
        3.5.1 持家基因序列獲得
        3.5.2 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        3.5.3 同義突變與非同義突變(不同持家基因選擇壓力分析)
        3.5.4 中性檢驗
        3.5.5 基因流和遺傳分化的統(tǒng)計分析
    3.6 致病性測定
4 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]煙草脈帶花葉病毒、蕪菁花葉病毒和馬鈴薯Y病毒的遺傳結(jié)構(gòu)分析[D]. 張成玲.山東農(nóng)業(yè)大學(xué). 2010

碩士論文
[1]獼猴桃潰瘍病抗性材料評價及其親緣關(guān)系的ISSR聚類分析[D]. 劉娟.四川農(nóng)業(yè)大學(xué). 2015
[2]應(yīng)用GFPuv標(biāo)記技術(shù)研究獼猴桃潰瘍病菌在組織中的侵染擴展動態(tài)[D]. 黃其玲.西北農(nóng)林科技大學(xué). 2013
[3]炭疽芽孢桿菌MLVA分子分型研究[D]. 吳松羽.南昌大學(xué). 2011



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