番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病（tomato bacterial speck）是一種常見(jiàn)的番茄病害,該病傳染性較強(qiáng)、發(fā)病較快,不易防治,影響了果實(shí)品質(zhì),降低番茄的產(chǎn)量。誘發(fā)該病害的病原微生物為丁香假單胞桿菌番茄致病變種（Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst）。在抗病番茄體內(nèi)存在Pto基因,編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,可以特異識(shí)別丁香假單胞桿菌釋放的效應(yīng)蛋白,由此激活下游防御反應(yīng)。Pto作為番茄抗病免疫機(jī)制中的一個(gè)樞紐蛋白,其下游途徑包括三個(gè)與其相互作用的轉(zhuǎn)錄因子,分別命名為Pti4、Pti5和Pti6,對(duì)這些Pto互作蛋白功能的研究利用了模式植物擬南芥,但它們?cè)诜阎械墓δ鼙硇腿孕栎^為系統(tǒng)的分析和比較。本文通過(guò)獲得穩(wěn)定遺傳的純合過(guò)表達(dá)遺傳轉(zhuǎn)化番茄株系對(duì)其功能進(jìn)行研究。q RT-PCR結(jié)果表明,Pti4、Pti5、Pti6過(guò)表達(dá)番茄植株中病程相關(guān)基因PR1、PR2、PR5的表達(dá)水平顯著升高;接種病原菌Pst DC3000后,植株葉片病斑與菌落計(jì)數(shù)均明顯低于野生型,抗病性提高。由于該類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子蛋白序列與植物特有的乙烯反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（ethylene response e... 

【文章來(lái)源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Pto介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模型

atingsequence，UAS）結(jié)合，而轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域則激活UAS下游基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄[77]。然而，當(dāng)BD或AD單獨(dú)存在時(shí)則不能激活下游基因的轉(zhuǎn)錄，兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間只有通過(guò)某種方式結(jié)合，或在空間上相互靠近才能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄激活的功能[78]。酵母雙雜交系統(tǒng)正是利用該特性將被檢測(cè)蛋白與DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域BD相連，表達(dá)為“誘餌”（Bait）融合蛋白，互作蛋白與轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域AD相連，表達(dá)“獵物”（Prey）蛋白，通過(guò)兩個(gè)雜交蛋白在酵母細(xì)胞中相互結(jié)合，激活UAS下游β-半乳糖苷酶報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄，從而探究?jī)煞N蛋白質(zhì)的相互作用[72,73,79]。圖1.2酵母雙雜交系統(tǒng)Fig1.2Theyeasttwo-hybridsystem酵母雙雜交技術(shù)不僅能檢測(cè)已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，還能從酵母cDNA文庫(kù)中篩選與已知蛋白互作的未知蛋白[80]。在過(guò)去的幾十年中，酵母雙雜交系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于篩選各種基因文庫(kù)，極大的節(jié)約了大規(guī)模文庫(kù)篩選的成本[81]。因此，構(gòu)建高質(zhì)量的酵母雙雜交cDNA文庫(kù)是用于篩選互作蛋白的重要保障[79,80]。植物cDNA文庫(kù)是以植物不同發(fā)育階段特定組織、器官的全部mRNA作為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成互補(bǔ)DNA，與相應(yīng)載體連接后轉(zhuǎn)化受體菌形成的重組DNA克隆集合，包含著植物該組織細(xì)胞中全部的mRNA信息[75,82]。同時(shí)，由于cDNA文庫(kù)不含有內(nèi)含子序列，因此便于廣泛克隆及表達(dá)。已有報(bào)道均表明Pti4、Pti5、Pti6可能在番茄免疫防御、生長(zhǎng)發(fā)育等多個(gè)過(guò)程發(fā)揮重要作用，然而近年來(lái)對(duì)Pti基因的研究較少，對(duì)植物體內(nèi)Pti的互作蛋白也所知甚少[78]。因此，本研究為了篩選與Pti互作的蛋白質(zhì)，構(gòu)建了酵母雙雜交文庫(kù)。由于Pti4、Pti5、Pti6在植物抗病中發(fā)揮重要作用，故該文庫(kù)由正常生長(zhǎng)未經(jīng)處理的野生型番茄植株葉片、以真空滲透法接種PstDC3000的感病株系prf3及抗性株系PtoR的番茄植株葉片?

泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]番茄心室形成相關(guān)調(diào)控基因的初步分析[D]. 劉瑩.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]大豆泛素化系統(tǒng)E2和E3酶基因的克隆與功能研究[D]. 杜秋麗.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
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碩士論文
[1]H2S/OASTL調(diào)節(jié)番茄果實(shí)采后貯藏品質(zhì)的生理機(jī)制研究[D]. 孫克克.合肥工業(yè)大學(xué) 2018
[2]番茄丁香假單胞菌抗病基因Pto互作蛋白功能分析[D]. 劉瑩.合肥工業(yè)大學(xué) 2017
[3]擬南芥CK1A基因功能初步分析[D]. 喻達(dá)時(shí).湖南大學(xué) 2009
[4]番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病的病原鑒定和內(nèi)生生防菌的篩選[D]. 楊春泉.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[5]番茄主要品質(zhì)性狀的遺傳研究[D]. 齊乃敏.揚(yáng)州大學(xué) 2005



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