稗草是稻田惡性雜草之一,嚴(yán)重影響水稻的產(chǎn)量,由此導(dǎo)致水稻栽培過(guò)程中除草劑大量使用,造成生態(tài)安全問(wèn)題。針對(duì)伴生雜草,部分水稻品種具有向環(huán)境中分泌足夠濃度的次生代謝物抑制其生長(zhǎng)的特性,這種特性稱(chēng)為水稻化感作用。具有抑草作用的次生代謝物稱(chēng)為水稻化感物質(zhì)。已報(bào)道的水稻化感物質(zhì)包括酚酸類(lèi)、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)及其衍生物等。酚酸類(lèi)化合物是一類(lèi)重要的水稻化感物質(zhì),主要來(lái)源于苯丙烷代謝途徑,苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL,EC 4.3.1.5）是該代謝途徑的關(guān)鍵酶,其活性大小決定了酚酸類(lèi)化合物含量的高低,化感水稻中的PAL活性及其基因表達(dá)水平高于非化感水稻,且逆境條件下化感水稻的PAL基因表達(dá)增強(qiáng)倍數(shù)明顯高于非化感水稻。水稻中的PAL是基因家族,為揭示化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont的PAL家族基因表達(dá)差異的內(nèi)在機(jī)制,本研究分別克隆PI312777和Lemont的PAL基因啟動(dòng)子,比較啟動(dòng)子的活性差異;對(duì)啟動(dòng)活性差異明顯的啟動(dòng)子,比較其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子種類(lèi)及表達(dá)差異,及啟動(dòng)子對(duì)應(yīng)的PAL成員基因?qū)λ净幸植菽芰Φ恼{(diào)控作用,研究PAL的蛋白作用網(wǎng)絡(luò),... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PI312777與Lemont的PAL基因成員啟動(dòng)子片段的凝膠電泳檢測(cè)及部分差異序列

不同化感水稻苯丙氨酸解氨酶（PAL）家族基因轉(zhuǎn)錄活性差異及其調(diào)控作用研究19通過(guò)比較PI312777和Lemont的OsPAL2;1和OsPAL2;2基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下FLAG的表達(dá)豐度，結(jié)果顯示，兩種水稻的OsPAL2;1基因啟動(dòng)子的啟動(dòng)活性沒(méi)有明顯的差異，兩種水稻的OsPAL2;2基因啟動(dòng)子的啟動(dòng)活性也沒(méi)有明顯的差異(圖2)。由此可見(jiàn)，在PI312777和Lemont中，OsPAL2;1,OsPAL2;2等基因的啟動(dòng)子組成序列在兩種水稻中的相似度高，其啟動(dòng)子的活性不存在明顯差異。圖2Western-blotting檢測(cè)OsPAL2;1和OsPAL2;2基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下FLAG的表達(dá)豐度Fig.2Western-blottingdetctionofthetranscriptionalactivityofOsPAL2;1andOsPAL2;2promoterstoexpressFLAGtag3.2PI312777和Lemont的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子活性差異進(jìn)一步研究了在PI312777和Lemont中序列組成差異較大的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子的活性，對(duì)兩種水稻的OsOAL2;4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下FLAG的表達(dá)豐度檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Lemont的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的FLAG的表達(dá)豐度略高于PI312777的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)的FLAG的表達(dá)豐度(圖3)；與此相似，本研究將兩個(gè)重組載體分別轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體細(xì)胞，通過(guò)激光共聚焦顯微觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白的熒光強(qiáng)度，結(jié)果也顯示Lemont的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GFP的熒光強(qiáng)度也略強(qiáng)于PI312777的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GFP的熒光強(qiáng)度(圖4)。這些結(jié)果表達(dá)Lemont的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子的活性略高于PI312777的OsPAL2;4基因啟動(dòng)子的活性。

Western-blotting檢測(cè)OsPAL2;4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下FLAG的表達(dá)豐度Fig.3Western-blottingdetctionofthetranscriptionalactivityofOsPAL2;4promoterstoexpress

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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