對(duì)去甲基化氮胞苷（5-AZA）的最佳濃度以及影響棉花角斑病菌[Xanthmonas campestris pv.malvacearum（Xcm）]V8電轉(zhuǎn)化效率的諸多因素進(jìn)行逐一研究,以期獲得高效的電轉(zhuǎn)化條件。結(jié)果表明,選取100μmol/L的5-AZA馴化處于對(duì)數(shù)中期的V8制備感受態(tài)細(xì)胞;保證電壓2.1 kV、50μg/mL質(zhì)粒7μL、4℃預(yù)冷復(fù)蘇培養(yǎng)基SOC、振蕩復(fù)蘇培養(yǎng)4～5 h時(shí),V8的電轉(zhuǎn)化效率高達(dá)5×102/μg DNA。 

【文章來源】：湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,59(12)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

5-AZA濃度對(duì)V8菌株電轉(zhuǎn)化效率的影響

V8培養(yǎng)到34 h左右，電轉(zhuǎn)化效率達(dá)到最高，此時(shí)對(duì)應(yīng)的菌液OD600 nm為0.6左右，說明對(duì)數(shù)中期的V8生長(zhǎng)旺盛，種群數(shù)量多，菌體粗壯，適合制備用于電轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞（圖2）。2.2.2 電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)V8電轉(zhuǎn)化效率的影響

在質(zhì)粒用量小于或等于7μL時(shí)，質(zhì)粒量與電轉(zhuǎn)化效率呈正相關(guān)，隨著質(zhì)粒量的提高，電轉(zhuǎn)化效率逐漸升高；但當(dāng)質(zhì)粒量超過7μL時(shí)，二者之間的關(guān)系轉(zhuǎn)變?yōu)樨?fù)相關(guān)。表明7μL的質(zhì)粒即可以使V8獲得3.1×102/μg DNA的電轉(zhuǎn)化效率（圖5）。圖4 質(zhì)粒濃度對(duì)V8菌株電轉(zhuǎn)化效率的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]棉花角斑病菌遺傳馴化體系的建立[J]. 王清,梁鵬,李響,劉文波,林春花,鄭服叢,繆衛(wèi)國(guó).  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(03)
[2]不同濃度的5-氮雜胞苷對(duì)RPMI8226細(xì)胞系的誘導(dǎo)凋亡作用分析[J]. 曲露露,馮獻(xiàn)啟,趙洪國(guó),王偉,隋愛華.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(13)
[3]hrcQ基因決定水稻條斑病菌在非寄主煙草上的過敏性反應(yīng)和在寄主水稻上的致病性[J]. 張鼎鼎,鄒麗芳,趙梅勤,鄒華松,陳功友.  中國(guó)水稻科學(xué). 2011(01)
[4]利用等電聚焦電泳研究黃單胞菌分類[J]. 徐寶梁,張志雍,葛起新,陳紅燕.  微生物學(xué)報(bào). 1993(01)

博士論文
[1]中國(guó)水稻白葉枯菌致病多樣性和遺傳多樣性分析與avrBs3/pthA家族新成員介導(dǎo)的表型研究[D]. 李崗.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]棉花角斑病菌由ClpA ATPase介導(dǎo)的逆境脅迫相關(guān)基因的功能[D]. 張明月.河南大學(xué) 2017
[2]哈氏噬纖維菌電轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化及表達(dá)體系的構(gòu)建[D]. 李鵬偉.山東大學(xué) 2012
[3]副豬嗜血桿菌突變系統(tǒng)的初步研究[D]. 吳東方.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]D-乳酸產(chǎn)生菌株的基因敲除[D]. 李爽.天津大學(xué) 2010



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