大白菜細(xì)菌性葉斑病主要發(fā)生在生育后期葉片上,嚴(yán)重的會導(dǎo)致大白菜葉片開裂、枯敗等,進(jìn)而危害大白菜的品質(zhì)和產(chǎn)量。該病害近些年來發(fā)生的頻率日趨頻繁,也日漸嚴(yán)重,而之前對該種病害專家和學(xué)者重視度較低,同時世界范圍內(nèi)也只有少數(shù)文獻(xiàn)被報(bào)道。本研究的目的是通過常規(guī)鑒定和分子鑒定,鑒定出哈爾濱地區(qū)大白菜細(xì)菌性葉斑病的致病菌是哪種病原菌,并進(jìn)行寄主范圍鑒定、回接鑒定、生理生化鑒定以及抗性鑒定方法研究。取得如下研究結(jié)果:1.經(jīng)過對哈爾濱地區(qū)大白菜葉斑病上分離的五株病原細(xì)菌的菌落形態(tài)、革蘭氏染色和鞭毛染色進(jìn)行常規(guī)鑒定,確定大白菜葉斑病病原菌屬于假單胞菌Pseudomonadaceae。2.對五株菌株進(jìn)行回接鑒定,回接鑒定顯示2號菌株接種的植株發(fā)病病癥與田間大白菜葉斑病病癥具有高度一致性,其他菌株發(fā)病病癥則相差甚遠(yuǎn),因此2號菌株很可能是大白菜細(xì)菌性葉斑病的致病菌。接下來對五株病原菌進(jìn)行分子鑒定,經(jīng)過對五株病原細(xì)菌的16s rDNA序列分別在NCBI數(shù)據(jù)庫中搜索比對。確定1號菌株屬于惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）;2號、4號、5號菌株屬于綠黃假單胞菌（Pseudomonas viridif... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

田間大白菜細(xì)菌性葉斑病癥狀Figure3-1ThebacterialleafspotsymptomsofChinesecabbageinthefield

22注：A.正面；B.背面；C.正面；D.背面Note：A.face side blade；B.back side blade；C.face side blade；D.back side blade圖 3-3 溫室內(nèi)大白菜葉斑病病癥Figure 3-3 The bacterial leaf spot symptoms of Chinese cabbage in the greenhouse3.1.2.3 大白菜葉斑病病原菌的分子鑒定分別用 5 株病原菌菌液 DNA 為模板，選用通用引物 1492R 和 27F[88]，對 16s rDNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，凝膠電泳所顯示的片段長度均在 1400 bp 左右，這與預(yù)期片段長度一致。經(jīng)蘇州金唯智生物科技有限公司北京分公司對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行序列測定，確定 5 株病原菌的 16s rDNA 序列長度分別為：1414 bp；1381 bp；1503 bp。將 5 株細(xì)菌的序列與GenBank 數(shù)據(jù)庫中 DNA 序列進(jìn)行 BLAST 比對，結(jié)果表明 1 號、2 號、3 號菌株的 16srDNA 序列分別與 Pseudomonas sp.AB680123.1；KY939759.1；JQ319033.1，相似度最高都達(dá)到了 99%，而 4 號、5 號菌株的 16s rDNA 序列分別與 Pseudomonas sp.JX077099.1；GQ398129.1，相似度達(dá)到 100%。確定 5 株病原菌均為假單胞菌屬，1 號菌株為惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）；2 號、4 號、5 號菌株為綠黃假單胞菌（Pseudomonasviridiflava）；3 號菌株為丁香假單胞菌（Pseudomonas syringae）。其中，2 號菌株的

圖 3-4 基于 16s rDNA 序列構(gòu)建的不同科、屬、種的農(nóng)作物的 Pseudomonasviridiflava 病原系統(tǒng)進(jìn)化樹Figure 3-4 Pseudomonasviridiflava pathogen phylogenetic tree of crops based on 16s rDNAsequences.3.2.2 病原菌寄主范圍鑒定根據(jù)報(bào)道，綠黃假單胞菌侵染的作物包括小麥、黃豆、花生、黃瓜、番茄、辣椒、甜瓜、油菜、菜豆、茄子、南瓜、豌豆、萵苣、甘藍(lán)、綠豆、蘿卜、甜菜、大蔥。經(jīng)過接菌鑒定，觀察發(fā)現(xiàn) 2 號綠黃假單胞菌菌株能夠侵染小麥、黃豆、花生、黃瓜、番茄、辣椒、菜豆、綠豆、豌豆、萵苣、甘藍(lán)、大蔥上，而對照未見病癥，如圖 3-5 所示。對于這十二種發(fā)病的作物通過病原菌分離、培養(yǎng)，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了發(fā)病的原因都是因?yàn)橛删G黃假單胞菌侵染而產(chǎn)生的病癥。說明試驗(yàn)所分離的綠黃假單胞菌寄主范圍也比較廣泛。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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