烯醇化酶（enolase,2-phospho-D-glycerate hydrolyase）作為糖酵解過(guò)程的限速酶,能催化磷酸甘油（PGA）向磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的轉(zhuǎn)化,也能催化其逆向反應(yīng)過(guò)程,因此烯醇化酶在細(xì)胞能量代謝過(guò)程中起著重要的作用。越來(lái)越多的研究證明烯醇化酶屬于一個(gè)新的蛋白家族,稱為兼職功能蛋白（moonlighting protein）,具有多種與細(xì)胞病理生理等活動(dòng)相關(guān)的功能,例如參與細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)以及病菌感染等過(guò)程。棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera（Lepidoptera:Noctuidae））作為世界性重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng),目前主要利用Bt（Bacillus thuringiensis,Bt）毒素來(lái)控制其為害。然而隨著B(niǎo)t棉的大面積推廣,棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt毒素產(chǎn)生的抗性機(jī)制將會(huì)影響B(tài)t棉長(zhǎng)期有效的應(yīng)用,所以了解烯醇化酶與棉鈴蟲(chóng)Bt抗性之間的關(guān)系是十分重要的。本研究以棉鈴蟲(chóng)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,首次克隆得到該基因完整的編碼區(qū)序列,開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1302bp,編碼432個(gè)氨基酸;該基因在許多物種中均存在且高度保守,與同屬夜蛾科的斜紋夜蛾（Spodoptera litur... 

【文章來(lái)源】：華中師范大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２人類ＥＮＯｌ的分子構(gòu)象（Ａ）以及活性位點(diǎn)（Ｂ）?１１２１??

，??ｔｈｅ?ｄｉｍｅｒ?ｉｎｔｅｒｆａｃｅ?ＨＨ，ＡＶ，Ａ，Ｎ，ＬＡ，?２０６－２０７，２１４，２１６，４０５??（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?Ｎ，ＬＲＥ?－４０６，４１２－４１３，４０９，４１６??ｓｉｔｅ）??膜結(jié)合位點(diǎn)?ＡＡＶＰＳＧＡＴＧＶ?３３－４３??Ｔｈｅ?ａｓｓｕｍｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ??ｒｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ??Ｅｎｏｌａｓｅ＿Ｎ?＾｜＾Ｐ＾＾｜Ｅｎｏｌａｓｅ＿Ｃ??．?????〇?１００?２００?３００?４００??圖４．２棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶保守的結(jié)構(gòu)域Ｅｎｏｌａｓｅ－Ｎ和Ｅｎｏｌａｓｅ－Ｃ??Ｆｉｇ．?４．２?Ａｎａｌｙｓｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｅｎｏｌａｓｅ?ｆｒｏｍ?Ｈ．?ａｒｍｉｇｅｒａ??２９??

文??ＭＡＳＴＥＲ＇Ｓ?ＴＨＥＳＩＳ??Ｅｇｇ：卵；１?ｉｎｓｔａｒ：?１?齡幼蟲(chóng)；２?ｉｎｓｔａｒ：?２?齡幼蟲(chóng)；３?ｉｎｓｔａｒ：?３?齡幼蟲(chóng)；４?ｉｎｓｔａｒ：?４??齡幼蟲(chóng)；５?ｉｎｓｔａｒ：?５?齡幼蟲(chóng)；Ｐｕｐａ：蛹；ｆｅｍａｌｅ?ａｄｕｌｔｓ：雌性成蟲(chóng)；Ｍａｌｅ?ａｄｕｌｔｓ：雄??性成蟲(chóng)??４．５棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶在細(xì)胞內(nèi)的定位情況??為了觀察棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶在昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)的分布情況，將構(gòu)建好的Ｐ??ｉｅ２－ＥＧＦＰ－Ｎｌ－ｅｎｏ轉(zhuǎn)染Ｈｉ５細(xì)胞系，經(jīng)過(guò)染核試劑染核制片后觀察（圖４．８），結(jié)果??顯示，融合蛋白分布于整個(gè)細(xì)胞，與信息學(xué)分析相一致，但在細(xì)胞核中的含量明顯??高于細(xì)胞質(zhì)中，并且部分融合蛋白在細(xì)胞質(zhì)中聚集，形成了一些點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。??Ｎｕｃｌｅｕｓ?Ｅｎｏｌａｓｅ－ＧＦＰ?Ｍｅｒｇｅｄ??■■■??圖４．８棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶在ＢＴＩ－Ｔｎ－５Ｂｌ－４?（Ｈｉ５）細(xì)胞中的定位??Ｆｉｇ．４．８?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｈａｒｍ－ｅｎｏｌｓｅ－ＧＦＰ?ｉｎ?ｉｎｓｅｃｔ?ｃｅｌｌｓ?ＢＴＩ－Ｔｎ－５Ｂｌ－４?（Ｈｉ５）．??Ｎｕｃｌｅｕｓ：細(xì)胞核指不劑熒光圖?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｐｈｏｔｏ?ｗｉｔｈ?ｎｕｌｅａｒ?ｓｔａｉｎ；?Ｅｎｏｌａｓｅ－ＧＦＰ：??Ｅｎｏｌａｓｅ－ＧＦＰ?融合蛋白的焚光圖?Ｅｎｏｌａｓｅ－ＧＦＰ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐｈｏｔｏ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；??Ｍｅｒｇｅｄ：焚光和細(xì)胞核指不劑拼和圖Ｍｅｒｇｅｄ?Ｐｉｃｔｕｒｅｓ．??４．６棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶蛋白的表達(dá)、純化和質(zhì)譜鑒定??４．６．１誘導(dǎo)表達(dá)棉鈴蟲(chóng)烯醇化酶蛋白??構(gòu)建完成的含ｐＥＴ３０ａ（

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]α-烯醇化酶在鼻咽癌中的表達(dá)[J]. 程超,龍孝斌,李欣,謝民強(qiáng),郭夢(mèng)和.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2011(12)
[2]α烯醇化酶——古老的蛋白,嶄新的功能[J]. 朱理安,方寧遠(yuǎn).  國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志. 2007(04)
[3]棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt的抗性篩選及交互抗性研究[J]. 梁革梅,譚維嘉,郭予元.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2000(04)
[4]人工飼養(yǎng)棉鈴蟲(chóng)技術(shù)的改進(jìn)[J]. 梁革梅,譚維嘉,郭予元.  植物保護(hù). 1999(02)



本文編號(hào)：3499938