細菌源脂肽類抗生素于上世紀60年代末從枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis的代謝產(chǎn)物中被發(fā)現(xiàn),在之后的半個世紀中其抗植物病原真菌、細菌、腫瘤等活性研究被大量報道,但迄今細菌源脂肽無法規(guī)模化提取與純化,因此其應(yīng)用研究難以開展。本文克服了細菌源脂肽的表面活性與起泡特性對其分離純化過程的干擾,首先為新結(jié)構(gòu)且活性好的BM脂肽建立了經(jīng)濟可行的規(guī)模化制備工藝。嚴格遵循“以極性為依據(jù)循序漸進除雜”的原則,對酸化沉淀、甲醇浸提、有機溶劑沉淀、鹽析、萃取、硅膠柱層析與HZ806大孔樹脂吸附等成熟且易于放大的分離純化單元工藝進行試驗與優(yōu)化,考察細菌源脂肽表面活性對這些工藝的影響,逐步去除雜質(zhì),建立其規(guī)�；苽湫鹿に�,并最終獲得高純度脂肽樣品。新工藝從含量為120 mg/L BM脂肽的海洋芽孢桿菌Bacillus marinus B-9987的發(fā)酵液中,規(guī)模制備了 87.51%-100%純度的BM脂肽樣品,收率>81.73%,實現(xiàn)了高純度細菌源脂肽樣品的百克級制備。而且該工藝對原料要求較低,允許發(fā)酵階段使用天然培養(yǎng)基,可從既有芽孢桿菌微生物農(nóng)藥的規(guī)模化生產(chǎn)過程中分離純化其中的脂肽,具有實際應(yīng)... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２．１?ＢＭ脂肽的高效液相檢測圖譜??Ｆｉｇ．?２．１?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＢＭ?ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ??根據(jù)上述定量檢測方法獲得檢測樣品溶液中ＢＭ脂肽的濃度之后，結(jié)合其在預(yù)處理??

華東理工大學(xué)博士學(xué)位論文?第３７頁??９０°Ｃ水浴中靜置４ｈ，之后取出樣品進行ＨＰＬＣ定量檢測分析，并與２５°Ｃ室溫條件下??的ＢＭ脂肽樣品含量進行比較，確定其具有較好的熱穩(wěn)定性，在２５－７０°Ｃ之間比較穩(wěn)定，??但在高于８０°Ｃ的環(huán)境下略有降解。ＢＭ脂肽熱穩(wěn)定性的考察結(jié)果詳見圖２．２。??２．２．２．２酸堿穩(wěn)定性試驗??將８７．５１％純度ＢＭ脂肽樣品水溶液的ｐＨ值分別調(diào)節(jié)至１．０－１０．０之間后，靜置過夜。??之后調(diào)節(jié)至中性并進行ＨＰＬＣ定量檢測分析，并與ｐＨ?７．０中性條件下的ＢＭ脂肽樣品??含量進行比較。結(jié)果表明，ＢＭ脂肽在ｐＨ?３．０－９．０之間穩(wěn)定性良好，但在過于酸性??（ｐＨ＜２．０）或過于堿性（ＰＨ＞９．０）的溶液中均會出現(xiàn)降解現(xiàn)象（詳見圖２．２）。??

９０°Ｃ水浴中靜置４ｈ，之后取出樣品進行ＨＰＬＣ定量檢測分析，并與２５°Ｃ室溫條件下??的ＢＭ脂肽樣品含量進行比較，確定其具有較好的熱穩(wěn)定性，在２５－７０°Ｃ之間比較穩(wěn)定，??但在高于８０°Ｃ的環(huán)境下略有降解。ＢＭ脂肽熱穩(wěn)定性的考察結(jié)果詳見圖２．２。??２．２．２．２酸堿穩(wěn)定性試驗??將８７．５１％純度ＢＭ脂肽樣品水溶液的ｐＨ值分別調(diào)節(jié)至１．０－１０．０之間后，靜置過夜。??之后調(diào)節(jié)至中性并進行ＨＰＬＣ定量檢測分析，并與ｐＨ?７．０中性條件下的ＢＭ脂肽樣品??含量進行比較。結(jié)果表明，ＢＭ脂肽在ｐＨ?３．０－９．０之間穩(wěn)定性良好，但在過于酸性??（ｐＨ＜２．０）或過于堿性（ＰＨ＞９．０）的溶液中均會出現(xiàn)降解現(xiàn)象（詳見圖２．２）。??＿＿＿??２５°Ｃ?４５°Ｃ?５０°Ｃ?６０°Ｃ?７０°Ｃ?８０°Ｃ?？§?ｐＨ?１．０?ｐＨ?２．０?ｐＨ?３．０?ｐＨ?４．０?ｐＨ?７．０?ｐＨ?８．０?ｐＨ?９．０?ｐＨ?１０．０??＾?Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?＾?Ａｃｉｄｉｔｙ?ａｎｄ?ａｌｋａｌｉｎｉｔｙ??圖２．２?ＢＭ脂肽的熱穩(wěn)定性與酸堿穩(wěn)定性（鄧肯氏新復(fù)極差法，／Ｋ０．０５，以下各圖均同）??Ｆｉｇ．?２．２?Ｔｈｅｒｍａｌ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ａｎｄ?ａｃｉｄｉｃ?ａｎｄ?ｂａｓｉｃ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＢＭ?ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ?（Ｄｕｎｃａｎ＇ｓ??ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｒａｎｇｅ?ｔｅｓｔ?ｗｉｔｈｐ＜０．０５

【參考文獻】：
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本文編號：3492336