夜蛾科（Noctuidae）害蟲種類多且危害廣,發(fā)生周期長,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來極大損失。目前夜蛾科害蟲的治理仍以化學防治為主,化學農(nóng)藥長期大量施用造成的“3R”問題,使生態(tài)環(huán)境日趨惡化,也使得有害生物的綠色防控成為眾望所歸。蘇云金桿菌（Bacillus thuringiensis,簡稱Bt）以其殺蟲專一性強、環(huán)境友好等特點,在害蟲生物防治中得到大量應用,但隨著Bt大面積的推廣應用,田間抗性種群也不斷產(chǎn)生,因此,不斷挖掘新的Bt菌株,篩選出高效、廣譜的cry基因尤為重要。本研究利用醋酸鈉選擇篩選法從黑龍江省不同類型的土壤中分離出蘇云金桿菌,并對其基因型進行了鑒定,以棉鈴蟲（Helicoverpa armigera Hubner）、甘藍夜蛾（Mamestra brassicae Linnaeus）、斜紋夜蛾（Spodoptera litura）為靶標,檢測了菌株對夜蛾科害蟲的生物活性,并對高毒力菌株的新基因進行了克隆與表達,獲得以下實驗結(jié)果:從黑龍江省不同地區(qū)采集的352土樣中分離出Bt菌株46株,出菌率為13.6%,其中哈爾濱等地區(qū)的黑土與伊春等地區(qū)的暗棕壤分離出來的Bt菌株最多,出菌率分別... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Cry蛋白進化樹劃分的3個區(qū)域Figure1-1ThreeDomainDendrogramtree1.5.2Bt的cry基因型鑒定方法

前 言in I, domain II, and domain III are shown in red, green, and blue, respectively圖 1-2 Cry 蛋白的晶體結(jié)構(gòu)Figure 1-2 Crystal structure of Cry Protein

圖 2-1 pET 28a（+）表達載體圖譜Figure 2-1 pET 28a（+）expression vector map的制備及目的基因的誘導表達的制備挑取 Bt 單菌落接種于 5 mL 液體 LB 培養(yǎng)基內(nèi)，30絕大部分晶體脫落，取 500 μL 菌液至 EP 管內(nèi)，冰=0.5 sec）。取 100 μL 菌液加入 50 μL 3×上樣 buffen 離心 1 min，取上清液待用。的誘導表達100 接種于含 34 μg/mL 氯霉素的 5 mL 液體 LB 培OD600=0.5-0.6，加入 50 μL 終濃度為 0.5 mmol/L 的 IP rpm 誘導 4 h，以未加 IPTG 誘導劑的作為陰性對照 500 μL PBS（pH 7.4）緩沖液懸浮，超聲破碎 6 m吸取上清和沉淀，沉淀用 500 μL 包涵體溶解液（Cl，pH 8.0）溶解。分別取 100 μL 樣品和 50 μL 3×pr

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]四川生態(tài)區(qū)蘇云金芽胞桿菌資源的篩選鑒定及其新型殺蟲基因的克隆表達研究[D]. 譚芙蓉.四川農(nóng)業(yè)大學 2008

碩士論文
[1]不同地區(qū)蘇云金芽胞桿菌vip3Aa基因的鑒定及殺蟲活性分析[D]. 李帥.東北農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]棉鈴蟲、甜菜夜蛾中腸受體蛋白與Bt毒素結(jié)合能力的研究[D]. 袁向東.中國農(nóng)業(yè)科學院 2016
[3]蘇云金芽胞桿菌的分離鑒定及高毒力菌株的研究[D]. 蘇俊平.河北農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]四川蒙頂山蘇云金芽胞桿菌cry基因鑒定及其新型模式cry基因的克隆與表達[D]. 關(guān)鵬.四川農(nóng)業(yè)大學 2010
[5]蘇云金芽孢桿菌殺蟲基因的鑒定、克隆與表達[D]. 董明.河北大學 2010
[6]雅安周公山蘇云金芽胞桿菌基因資源研究和殺蟲基因的克隆[D]. 李云艷.四川農(nóng)業(yè)大學 2008



本文編號：3482089