發(fā)布時間：2021-10-25 15:15

　　褐飛虱（Nilaparvata lugens）是我對水稻的危害極大,目前控制褐飛虱的數(shù)量主要靠噴灑農(nóng)藥,但是過量的農(nóng)藥會造成環(huán)境污染,同時還會使褐飛虱產(chǎn)生抗藥性,促進(jìn)其產(chǎn)生新的生物型。當(dāng)前最有效的方法是培育帶抗性位點(diǎn)的水稻,因此探索發(fā)現(xiàn)更多的抗性位點(diǎn)對害蟲的控制具有很重要的意義。乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase,AChE）的經(jīng)典功能為水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿,維持信號傳遞。這里我們關(guān)注更多的是它的非經(jīng)典功能:參與細(xì)胞凋亡。目前市面上出售的殺蟲劑很多工作原理都是通過與AChE結(jié)合使其失活,導(dǎo)致乙酰膽堿過量,害蟲興奮致死。我們應(yīng)該重視對AChE的研究,從而為開發(fā)出新型的農(nóng)藥奠定了基礎(chǔ)。本研究中,我們采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）結(jié)合TUNEL染色技術(shù)和Hoechst染色技術(shù),初步研究褐飛虱中腸細(xì)胞不同抗性水稻汁液的誘導(dǎo)下,細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例、凋亡細(xì)胞中AChE的表達(dá)量變化。用感蟲水稻TN1、抗蟲水稻B5和TKM-6幼苗汁液分別處理I型褐飛虱的中腸細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加抗蟲水稻汁液組,細(xì)胞凋亡率和AChE表達(dá)水平比感蟲組高。為了進(jìn)一步驗(yàn)證AChE在抗蟲組的高表達(dá),利用RT-PC... 

【文章來源】：湖北大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

褐飛虱翅二型的形態(tài)

第一章 緒論9圖1-4-1 酵母雙雜交原理示意圖以前我們用AH109菌株，但是需要多次轉(zhuǎn)質(zhì)粒到一種菌中，費(fèi)時而且麻煩。改進(jìn)的系統(tǒng)。只需要將兩種菌株進(jìn)行mating后篩選，這樣更加方便。改造后的Y2HGold和Y187菌株包括酵母報(bào)告基因的上游活化序列和特定的報(bào)告基因(HIS3, ADE2, AURl-C, MEL-1)（如圖1-4-2）[68]，不含有轉(zhuǎn)錄因子的編碼基因。圖1-4-2 酵母雙雜交菌株報(bào)告基因示意圖基于這原理，我們把目的基因連接到pGBKT7-BD上構(gòu)建誘餌載體，繼而轉(zhuǎn)Y2HGold；同時我們利用pGADT7-AD和Y187構(gòu)建研究材料的cDNA文庫。將文庫菌液和誘餌菌株菌液混合培養(yǎng)，用二缺型培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，這樣能生長在缺陷培養(yǎng)基上就叫陽性克隆，之后我們進(jìn)行更加嚴(yán)密反復(fù)的篩選。

只需要將兩種菌株進(jìn)行mating后篩選，這樣更加方便。改造后的Y2HGold和Y187菌株包括酵母報(bào)告基因的上游活化序列和特定的報(bào)告基因(HIS3, ADE2, AURl-C, MEL-1)（如圖1-4-2）[68]，不含有轉(zhuǎn)錄因子的編碼基因。圖1-4-2 酵母雙雜交菌株報(bào)告基因示意圖基于這原理，我們把目的基因連接到pGBKT7-BD上構(gòu)建誘餌載體，繼而轉(zhuǎn)Y2HGold；同時我們利用pGADT7-AD和Y187構(gòu)建研究材料的cDNA文庫。將文庫菌液和誘餌菌株菌液混合培養(yǎng)，用二缺型培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，這樣能生長在缺陷培養(yǎng)基上就叫陽性克隆，之后我們進(jìn)行更加嚴(yán)密反復(fù)的篩選。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]AChE在水稻抗性誘導(dǎo)的褐飛虱凋亡中腸細(xì)胞中的定位及表達(dá)[J]. 王斯奇,陳俊,章娟娟,楊之帆.  昆蟲學(xué)報(bào). 2016(10)
[2]植物組成型防御對植食性昆蟲的影響[J]. 陳哲.  北京農(nóng)業(yè). 2015(09)
[3]昆蟲乙酰膽堿酯酶研究進(jìn)展[J]. 林璐璐,陳浩梁,謝明惠,蘇衛(wèi)華.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[4]免疫組織化學(xué)技術(shù)在雌激素受體檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 王利花,張鴻雁,周建華.  化學(xué)研究與應(yīng)用. 2013(11)
[5]聚合抗褐飛虱基因bph20（t）和bph21（t）及抗稻瘟病基因Pi9水稻株系篩選[J]. 趙鵬,馮冉冉,肖巧珍,楊培忠,林緯,劉丕慶,李容柏.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(06)
[6]豬源凋亡相關(guān)基因SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR方法的建立[J]. 李玉明,王剛,汪志艷,劉永剛,涂亞斌,王淑杰,姜成剛,王延群,蔡雪輝.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(05)
[7]植物與植食性昆蟲相互作用的分子機(jī)制[J]. 劉志源,孫玉誠,王國紅.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2012(06)
[8]水稻抗褐飛虱基因及其利用現(xiàn)狀研究[J]. 楊瓊,邱琳,羅科,曾傳敏,譚慶云,涂升斌.  種子. 2012(10)
[9]水稻抗褐飛虱育種研究的現(xiàn)狀與展望[J]. 鄧飛,倪深,朱旭東.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011(24)
[10]實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 陳旭,齊鳳坤,康立功,李景富.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(08)

博士論文
[1]稻縱卷葉螟和褐飛虱侵害對水稻根系營養(yǎng)吸收的影響及褐飛虱再猖獗生理機(jī)制[D]. 印建莉.揚(yáng)州大學(xué) 2009

碩士論文
[1]灰飛虱對水稻秧苗的為害機(jī)制及其對水稻后期生長的影響[D]. 林冬春.揚(yáng)州大學(xué) 2009



本文編號：3457666