由甘蔗鞭黑粉菌（Sporisorium scitamineum）引起的甘蔗鞭黑穗病是一種重要的甘蔗病害,已對(duì)我國(guó)甘蔗糖業(yè)造成嚴(yán)重的影響。開(kāi)展該病菌有性配合與致病相關(guān)基因的分離與功能鑒定,可為從分子水平上了解甘蔗鞭黑粉菌的致病機(jī)制及病菌與甘蔗的相互作用提供依據(jù),同時(shí)也可為抗病育種提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。本研究以甘蔗鞭黑粉菌野生型菌株WT18和WT17為出發(fā)菌株,用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）方法,建立了擁有13000個(gè)具有潮霉素抗性的T-DNA隨機(jī)插入突變體庫(kù);經(jīng)營(yíng)養(yǎng)平板上有性配合試驗(yàn),篩選獲得了12個(gè)有性配合能力缺陷突變體,PCR驗(yàn)證和Southern雜交分析結(jié)果表明T-DNA插入在甘蔗鞭黑粉菌基因組中且均為單拷貝插入。隨機(jī)挑選3個(gè)出自WT18的缺乏有性配合能力突變體33、91和14137及1個(gè)出自WT17的有性配合能力明顯減弱突變體6425與相對(duì)性系野生型菌株菌體等量混合后注射接種甘蔗苗,結(jié)果表明野生型發(fā)病率為100%、突變體91和突變體6425發(fā)病率為26.67%,而突變體33和... 

【文章來(lái)源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Sporisoriumscitamineum的生活史（Tanigutietal.,2015）

調(diào)整基因表達(dá)，從而使細(xì)胞可以應(yīng)對(duì)環(huán)境的刺激yces cerevisiae）中，主要與有性配合、菌絲生長(zhǎng)、細(xì)胞完透壓反應(yīng)相關(guān)（Gustin et al., 1998；Panet al., 2000；Gancedo, 20Chen et al., 2007）。Prf1 活性的調(diào)控與轉(zhuǎn)錄時(shí)不同的碳源水后的 cAMP 水平和信息素水平有關(guān)（Hartmannet al., 1996）過(guò)cAMP–PKA信號(hào)途徑的磷酸化作用或者通過(guò)MAPK 級(jí)聯(lián)994；Durrenberger et al., 1998；Andrews et al., 2000；Muller et a中 prf1 轉(zhuǎn)錄因子可以整合來(lái)自?xún)蓚�(gè)不同途徑的信號(hào)通路并調(diào)控不同的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（Kaffarnik et al., 2003）。

圖 3 用于隨機(jī)突變的雙元載體 pAnEX3-gpdA-eGFP2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和抗生素利福平（Rifanpicin，Rif），壯觀霉素（Spectinomycin，Spec），頭孢噻肟鈉（Cefotaxime，Cef），氨芐青霉素（Ampicilin，Amp），乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）卡那霉素（ Kannamycin ， Kan ） 購(gòu) 自 北 京 鼎 國(guó) 公 司 ； 2-(N- 嗎 啡 啉 ) 乙 磺 酸（2-morpholinoethanesulfonic acid，MES）購(gòu)自 Sigma 公司；潮霉素（Hygromycin，Hyg）購(gòu)自 Calbiochem 公司；混合纖維素微孔濾膜（0.45 μm）購(gòu)自上海新亞凈化材料廠；SanPrep 柱式 DNA 膠回收試劑盒、PCR 純化試劑盒、SanPrep 柱式質(zhì)粒 DNA小量抽提試劑盒購(gòu)自 Omega 公司，PrimerSTAR 高保真聚合酶、LATaq 酶和 RACE 試劑盒購(gòu)自 TAKARA 公司，地高辛 DNA 高效標(biāo)記與檢測(cè)試劑盒購(gòu)自 Roche 公司

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]棉花GhWD40基因的克隆及功能驗(yàn)證[D]. 李潔.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3440720