大豆疫霉根腐病是一種毀滅性的土傳病害,由Phytophthora sojae引起。該菌寄主范圍窄,只侵染大豆。細(xì)胞有絲分裂S期激酶相關(guān)蛋白Skp1是泛素連接酶家族SCF復(fù)合物（Skp1-Cul1-F-box蛋白）的一個(gè)成員,大豆疫霉主要是通過菌絲體和游動(dòng)孢子進(jìn)行病害的傳播,如果能夠破壞菌絲體的生長(zhǎng)和游動(dòng)孢子的產(chǎn)生,就可以有效的防治病害。本文研究的細(xì)胞有絲分裂S期激酶相關(guān)蛋白Skp1白能夠影響生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的分泌,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理周期,并參與生物發(fā)育過程。本驗(yàn)通過RAN干擾技術(shù),構(gòu)建了Phytophthora sojae Skp1基因的沉默表達(dá)載體pTOR-Skp1-GFP。利用原生質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化方法,將沉默載體導(dǎo)入野生型大豆疫霉6497中,從而使目的基因得到瞬時(shí)表達(dá),實(shí)驗(yàn)獲得了該基因的沉默突變菌株。通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn),選擇出突變菌株中Skp1基因表達(dá)量比較低的兩個(gè)菌株,命名為L(zhǎng)1、L2進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過脅迫、菌絲侵染、游動(dòng)孢子誘導(dǎo)和致病性測(cè)定、電鏡觀察試驗(yàn),對(duì)沉默突變體進(jìn)行表型分析。通過對(duì)沉默突變菌株進(jìn)行生長(zhǎng)速率測(cè)定試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)沉默突變體的生長(zhǎng)速度較為緩慢;把突變體在脅迫培養(yǎng)基上培養(yǎng),分析得... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

真核生物系統(tǒng)發(fā)育簡(jiǎn)圖（摘自Govers和Gijzen，2006）

phylogeny of eukaryotes. (from Govers and Gijzen, 2006)1.2 大豆疫霉概述大豆疫霉的繁殖方式可以分為有性生殖生長(zhǎng)階段和無性生殖生長(zhǎng)階段（如圖2）。產(chǎn)生的孢子分別為卵孢子和游動(dòng)孢子。大豆疫霉在環(huán)境較好條件下，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)產(chǎn)生無隔菌絲，環(huán)境不良會(huì)引起菌絲老化，造成菌絲頂端分支較多并且膨大，是營(yíng)腐生的異養(yǎng)型真菌。在實(shí)際生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)，由于其菌絲、孢子囊、游動(dòng)孢子在低溫環(huán)境下（低于 3℃）都難以存活[2]，但是卵孢子在寒冷環(huán)境條件下，可以產(chǎn)生較厚的細(xì)胞壁，度過不良的生活環(huán)境，來年進(jìn)行萌發(fā)，是造成再侵染的主要來源。環(huán)境適宜條件下則主要產(chǎn)生游動(dòng)孢子，在潮濕的環(huán)境下，會(huì)隨著水流進(jìn)行傳播，造成病害的大面積流行，是病害發(fā)生的主要因子，所以本文主要是針對(duì)游動(dòng)孢子做了深入的研究。在濕度較大環(huán)境中大豆疫霉菌絲生長(zhǎng)較好，主要是生長(zhǎng)速率加快，正常的菌絲分支夾角近似 90 度。大多數(shù)豆疫霉菌株的菌絲生長(zhǎng)最低為 5℃，最高不能超過 35℃，26℃左右生長(zhǎng)的最好。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)孢子囊經(jīng)低溫刺激之后會(huì)釋放大量的游動(dòng)孢子，游動(dòng)孢子在 20℃環(huán)境中生長(zhǎng)的最好，對(duì)于孢子的保存不能低于5℃，游動(dòng)孢子遇到水流?

藥劑防治容易產(chǎn)生抗藥性并且污染環(huán)境，培育抗病品種抗性會(huì)退化，大豆疫霉的分子生物學(xué)研究可能會(huì)給大豆疫霉防治提供一種新的思路。 細(xì)胞有絲分裂 S 期激酶相關(guān)蛋白 Skp1 的概述細(xì)胞有絲分裂S期激酶相關(guān)蛋白Skp1是泛素SCF (Skp1-CUL1-F-box pro酶復(fù)合體重要組成部分，調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂過程蛋白泛素化,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄1 是 SCF 復(fù)合物中的一個(gè)關(guān)鍵的骨架蛋白( 圖 3), 同時(shí) 結(jié)合 F-box 蛋ul1[3]。 SCF 復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)蛋白濃度具有關(guān)鍵作用，主要通一些蛋白的分解，加快細(xì)胞進(jìn)入生理周期，促進(jìn)細(xì)胞分化，從而加快細(xì)胞生長(zhǎng)。Skp1 主要在蛋白之間進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)，可以和一種蛋白特異性結(jié)合結(jié)合另外異種蛋白，從而使細(xì)胞能夠保持正常的生理周期。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3437958