環(huán)境水（河流、湖泊、灌溉水、海水、自來水等）中致病性病毒的存在嚴(yán)重威脅著人類健康和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。在環(huán)境水中已被證實(shí)存在有眾多的植物病毒,這些水源的植物病毒有可能進(jìn)入病害循環(huán),從而導(dǎo)致植物病毒病害的傳播和擴(kuò)散。本研究主要檢測環(huán)境水中的植物病毒,通過濃縮分離方法,建立環(huán)境水中植物病毒檢測與鑒定的技術(shù)體系,同時(shí)測試環(huán)境水中植物病毒分離物對寄主植物的侵染性。主要結(jié)果如下:1.對山東、河北、內(nèi)蒙古和黑龍江地區(qū)采集的65份水樣品濃縮提純后,利用4對屬引物和15對特異性引物進(jìn)行檢測。其中,山東地區(qū)從泰安、濟(jì)南、煙臺、濱州、淄博、威海、聊城、濟(jì)寧、德州和濰坊10個(gè)地區(qū)采樣,共檢測到黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）、煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、番茄花葉病毒（Cucumber mosaic virus,ToMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、辣椒輕斑駁病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）、番茄褪綠病毒（Tomato chlorosi... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 環(huán)境水中植物病毒的簡介
        1.1.1 植物病毒在環(huán)境水中的來源
        1.1.2 植物病毒在水中的存活
        1.1.3 水作為傳播植物病毒的介體及制約因素
    1.2 水體中病毒的濃縮方法與檢測技術(shù)
        1.2.1 水體中病毒的濃縮方法
        1.2.2 水體中病毒的檢測技術(shù)
    1.3 水體中檢出的部分病毒簡介
        1.3.1 煙草花葉病毒簡介
        1.3.2 番茄花葉病毒簡介
        1.3.3 黃瓜綠斑駁花葉病毒簡介
    1.4 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 菌株、分子生物學(xué)及生化試劑
        2.1.3 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制方法
    2.2 環(huán)境水中植物病毒的鑒定及檢測
        2.2.1 環(huán)境水中植物病毒的濃縮方法
        2.2.2 病毒粒子DNA/RNA共提取
        2.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
        2.2.5 PCR擴(kuò)增
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.2.7 PCR產(chǎn)物目的片段回收
        2.2.8 連接載體
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.10 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.2.11 PCR方法鑒定陽性菌落
        2.2.12 序列測定及數(shù)據(jù)分析
    2.3 環(huán)境水中植物病毒接種鑒定
        2.3.1 摩擦接種法
        2.3.2 接種病株RNA提取
        2.3.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.3.4 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
        2.3.5 PCR擴(kuò)增
        2.3.6 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.3.7 PCR產(chǎn)物目的片段回收
        2.3.8 連接載體
        2.3.9 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.3.10 PCR方法鑒定陽性菌落
        2.3.11 序列測定及數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 環(huán)境水中植物病毒檢測及鑒定
        3.1.1 環(huán)境水中植物病毒種類檢測結(jié)果
        3.1.2 環(huán)境水中植物病毒檢出率
        3.1.3 不同環(huán)境水中植物病毒分布情況
        3.1.4 不同環(huán)境水中植物病毒的檢出類型
    3.2 煙草花葉病毒的接種鑒定與分析
        3.2.1 濟(jì)南地區(qū)TMV接種檢測及鑒定
        3.2.2 序列一致性分析
        3.2.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
    3.3 黃瓜綠斑駁花葉病毒的接種鑒定與分析
        3.3.1 山東地區(qū)CGMMV接種檢測及鑒定
        3.3.2 序列一致性分析
        3.3.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
    3.4 番茄花葉病毒的接種鑒定與分析
        3.4.1 濟(jì)南地區(qū)ToMV接種檢測及鑒定
        3.4.2 序列一致性分析
        3.4.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
4 討論
    4.1 環(huán)境水中植物病毒檢測鑒定
    4.2 對環(huán)境水中已檢出的TMV、ToMV和CGMMV接種鑒定
    4.3 構(gòu)建TMV、ToMV和CGMMV系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3436984