木霉Trichodermaguizhouense NJAU 4742是由本課題組分離篩選并進行商業(yè)化應用（生物有機肥）的重要菌株。在盆栽和大田實驗條件下,該菌株均表現(xiàn)出優(yōu)異的植物促生和生防土傳真菌病害的功效。圍繞其開展的一系列研究工作不僅具有科學參考價值,而且具有重要的實際指導意義。Hydrophobin（簡寫為HFB）,是一類絲狀真菌特有的具有高度表面活性的雙親小分子蛋白,其同時擁有疏水結構域和親水結構域,可以自組裝式地在疏水-親水界面形成單分子蛋白膜,這對真菌自身生長及與周圍環(huán)境或宿主互作都具有重要生物學意義。本研究首先對該菌株進行了盆栽和大田實驗以驗證其植物促生效應和根際定殖能力;然后利用基因轉(zhuǎn)錄分析、酵母異源表達、基因敲除和超表達等方法,在基因和蛋白水平上探究了木霉NJAU 4742菌株hfb家族基因的特性,主要結果如下:1.在盆栽和田間試驗條件下,NJAU 4742菌株可有效定殖于根際,并促進番茄苗生長,與不接菌對照組相比生物量提高20%以上,田間產(chǎn)量提高10%。通過HPLC、LC/MS、GC/MS、NMR等手段從該菌株發(fā)酵液中分離純化獲得一促生活性物質(zhì)——Harzianol... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－４促生物質(zhì)Ｐｌ９的ＬＣ／ＭＳ—級質(zhì)譜圖（ａ）和ＧＣ／ＭＳ二級質(zhì)譜圖（ｂ）??Ｆｉｇ．?２－４?ＬＣ／ＭＳ?（ａ）?ａｎｄ?ＧＣ／ＭＳ?（ｂ）?ｍａｓｓ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?Ｐ１９??表２－４促生物質(zhì)Ｐ１９的１Ｈ和１３Ｃ核磁共振譜解析結果??Ｔａｂｌｅ?２－４?ｌＵ?ａｎｄ?１３Ｃ?ＮＭＲ?ｓｐｅ?

?第三章木霉ＨＦＢ家族成員鑒定及其ＨＦＢｏｍｅ轉(zhuǎn)錄響應???７?ｄａｙｓ?１４?ｄａｙｓ??：?——?３０００ｂｐ???１０００ｂｐ??＼??５００ｂｐ??｜???４００ｂｐ??；??３００ｂｐ??｜???２００ｂｐ??１００ｂｐ??ｔｅｆｌ?ｈｆｂ４?ｔｅｆｌ?ｈｆｂ４?Ｍ??圖３－４木霉ＮＪＡＵ?４７４２孢子在不同培養(yǎng)時間內(nèi)的ＨＦＢｏｍｅ轉(zhuǎn)錄響應（結果以Ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ａｎａｌｙｚｅｒ??電泳圖譜顯示）??Ｆｉｇ．?３－４?ＨＦＢｏｍｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?Ｔ．?ｇｕｉｚｈｏｕｅｎｓｅ?ＮＪＡＵ?４７４２?７－ｄａｙ－ｏｌｄ?ａｎｄ?１４－ｄａｙ－ｏｌｄ?ｓｐｏｒｅｓ??Ｍ，即?ＤＮＡ?３５－６０００?ｂｐ?ｌａｄｄｅｒ??Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＲＴ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?（ｄｕｐｌｉｃａｔｅｓ）?ｗａｓ?ｇｉｖｅｎ?ｂｙ?Ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ａｎａｙｌｚｅｒ？?ｕｓｉｎｇ?ｔｈｅ??Ｓｔａｎｄａｒｄ?Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ＮＧＳ?Ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ａｎａｌｙｓｉｓ?Ｋｉｔ．?Ｔｈｅ?ｔｅｆｌ?ｇｅｎｅ?ｗａｓ?ｕｓｅｄ?ａｓ?ａ?ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．?Ｍ，??ＤＮＡ?３５－６０００ｂｐ?ｌａｄｄｅｒ??３討論??ＨＦＢ是絲狀真菌特有的胞外分泌小蛋白，在真菌的生長發(fā)育及其與寄主的互作中??都扮演著非常重要的角色。目前，有關真菌／？／＆基因家族成員在序列和表達分化上的??研究較為少見（Ｒａｊａｓｈｅｋａｒｅｔａｌ．２００７）。本研究中，通過基因挖掘技術，共在木霉ＮＪＡＵ??４７４２菌株基因組中發(fā)現(xiàn)１０個／

其Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｎ家族基因特性研究???３?ＨＦＢ４?ＨＰＢ８?ＨＦＢ１５?ＨＦＢ４：：ＧＦＰｕｖ?ＨＦＢ８：ｍｉＦｆｆＰ?Ｍ?［｝?ＨＦＢ４?ＨＦＢ８?ＨＦＢ１５?ＨＦＢ４：：ＧＦＰＵＶ?ＨＦＢ８：：ｍＲＦＰ?Ｍ??—７０ＫＤ??！?＾－５５ＫＤ?－＾５５ＫＤ??－＾３５ＫＯ?—＊３５ＫＤ??＃?—＾２５１（０?—＾２５Ｘ０??費讀??，匕—？ｌＳＫＤ?—？ｌＳＫＤ?????．；；ｍｍｒ?＇?．＿｜惑??，，，?＾－ｌＯＫＯ?＾－ｌＯＫＤ??圖４－５酵母工程菌表達的ＨＦＢ蛋白及其熒光標記融合蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ａ）與Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?（ｂ）分??析??Ｆｉｇ．?４－５?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?（ａ）?ａｎｄ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?（ｂ）?ａｎａｌｙｓｅｓ?ｏｆ?Ｐｉｃｈｉａ－ｐｒｏｄｕｃｅｄ?ＨＦＢｓ?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ??ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－ｆｉｉｓｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??Ｍ，?ＢＰ?ＰａｇｅＲｕｌｅｒ？?Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｌａｄｄｅｒ?（１０－１８０?ＫＤ，?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）??Ｍ，?ＰａｇｅＲｕｌｅｒ？?Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｌａｄｄｅｒ?（１０－１８０?ＫＤ，?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）??２．３?ＨＦＢ重組蛋白的功能特性鑒定??２．３．１?ＨＦＢ重組蛋白的粒徑??動態(tài)光散射（ＤＬＳ）結果（見表４－３和圖４－６）表明，ＨＦＢ４和ＨＦＢ８重組蛋白在水??溶液中主要以單體形式存在（分別占所測顆粒物總質(zhì)量的９４．０?％和９３．７％），水力半??徑分別為４．４?ｎｍ和６．８?ｎｍ；而ＨＦＢ１５在水中則


本文編號：3434191