粉紅螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea）是一類重要的生防真菌,可以防治灰霉菌、核盤菌、立枯絲核菌等多種植物真菌病害,具有很強(qiáng)的生防潛力。目前真菌制劑多為分生孢子制劑,穩(wěn)定性較差,貨架期短。厚垣孢子是真菌在特定條件下產(chǎn)生的一種抗逆結(jié)構(gòu),對真菌生防制劑的研發(fā)具有重要意義,但迄今關(guān)于生防真菌厚垣孢子形成相關(guān)基因的研究極少。為篩選粉紅螺旋聚孢霉產(chǎn)厚垣孢子相關(guān)基因,本研究以實驗室前期分離的粉紅螺旋聚孢霉高效菌株67-1為材料,通過高通量測序獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)厚垣孢子轉(zhuǎn)錄組,篩選出不同產(chǎn)孢條件下穩(wěn)定表達(dá)的適宜內(nèi)參基因,并通過基因敲除,證明己糖激酶基因、聚酮化合物羥化酶基因和醛脫氫酶基因在粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株厚垣孢子形成過程中的作用,為揭示厚垣孢子形成機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。為獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)厚垣孢子相關(guān)基因,本實驗以粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株為材料,分別在36 h和72 h取樣,通過高通量測序技術(shù)和實時熒光定量PCR獲得粉紅螺旋聚孢霉67-1菌株產(chǎn)孢差異表達(dá)基因。轉(zhuǎn)錄組分析獲得549,661,174 clean reads。36 h時有67個基因上調(diào)表達(dá),... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

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農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 產(chǎn)厚垣孢子轉(zhuǎn)錄組測序與分析 實驗結(jié)果.1 分生孢子和厚垣孢子顯微觀察以實驗室前期設(shè)計的產(chǎn)孢培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)條件及 pH 和溫度，對產(chǎn)厚垣孢養(yǎng)基進(jìn)一步優(yōu)化，獲得粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株產(chǎn)厚垣孢子適宜培養(yǎng)基。用顯微鏡（Olympus61, Tokyo, Japan）觀察分生孢子和厚垣孢子。在厚垣孢子培養(yǎng)過程中，分生孢子被抑制，分生培養(yǎng)過程中未觀察到厚垣孢子。可以看到厚垣孢子來自菌絲的頂端或者中部，在培養(yǎng)后期大菌絲都能轉(zhuǎn)化成厚垣孢子，和分生孢子相比，厚垣孢子較大、細(xì)胞壁較厚（圖 2.2）。

圖 2.3 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個樣品提取 RNA 電泳驗證對照（產(chǎn)分生孢子過程）36 h 三個重復(fù)，4-6 表示對照 72 h 三個重復(fù)，7-9 表示處理（產(chǎn)厚垣孢子過個重復(fù)，10-12 表示處理 72 h 三個重復(fù)Fig. 2.3 Electrophoresis verification of 12 RNA samples extracted from C. rosea 67-1 strain three repeats of the control ( process produce conidiospores) at 36 h, 4-6 show three repeats of the control ahow three repeats of the treatment (process produce chlamydospores) at 36 h, 10-12 show three repeats ot at 72 h表 2.2 粉紅螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 個樣品 RNA 提取質(zhì)量Table 2.2 Quality of 12 RNA extracted from C.rosea 67-1 strainConcentration(ng/ l)Amount( g)OD260/280OD260/230RIN 28S/18S-1 225 15.75 2.15 2.21 8.4 1.6-2 229 16.03 2.16 2.26 9.3 1.7-3 158 18.96 2.13 2.11 9.0 1.6-1 178 24.92 2.13 2.23 9.8 1.7-2 194 13.58 2.17 2.24 9.3 1.8


本文編號：3433802