有機磷農(nóng)藥（organophosphorus pesticides,OPs）是一類能夠抑制膽堿酯酶活性,具有廣譜殺蟲性和較低穩(wěn)定性的農(nóng)藥,在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用很廣泛。但是,大量使用有機磷農(nóng)藥造成的食品和環(huán)境中有機磷農(nóng)藥的殘留,對人們的身體健康構(gòu)成了嚴重的威脅。免疫分析法是一種快速、靈敏、簡便并且成本較低的檢測方法,適用于農(nóng)藥殘留樣品的日常高通量檢測的需要。由于有機磷農(nóng)藥種類較多,且多采用混配的方式使用,因此,制備有機磷農(nóng)藥的寬譜特異性抗體并建立有機磷農(nóng)藥多殘留免疫分析方法是十分必要的。在本研究中,我們首先設(shè)計并合成了一系列有機磷農(nóng)藥的通用結(jié)構(gòu)半抗原,然后將半抗原偶聯(lián)載體蛋白合成了人工免疫原和包被原。一方面,利用合成的免疫原免疫BALB/C小鼠,并制備了兩種有機磷農(nóng)藥寬譜特異性單克隆抗體,然后利用單克隆抗體和相應(yīng)的最佳包被原建立了有機磷農(nóng)藥多殘留免疫分析方法。另一方面,通過構(gòu)建噬菌體單鏈抗體文庫,利用噬菌體展示技術(shù)篩選獲得了一種有機磷農(nóng)藥寬譜特異性單鏈抗體,并建立了一種基于單鏈抗體有機磷農(nóng)藥多殘留的免疫分析方法。此外,本研究還以制備的單克隆抗體為靶標,利用噬菌體展示技術(shù)篩選獲得了其抗原模... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

噬菌體展示基本原理和篩選過程

新型凈化處理技術(shù)發(fā)展迅速，目前，食品中農(nóng)藥殘留分析的主要樣品固相萃取、分散固相萃取、固相微萃取、液-液微萃取、超聲輔助萃等（陳子鍵等，2015）。相萃取法萃�。╯olid-phase extraction, SPE）是由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比可以提高更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理步驟。SPE 操作，是農(nóng)藥殘留檢測中常用的樣品前處理方法。針對填料保留機理的不留目標化合物 SPE 和保留雜質(zhì) SPE。其中保留目標化合物的 SPE 在應(yīng)用更為廣泛，其具體操作是將樣品加入到已活化的固相吸附劑中，質(zhì)而分析物仍留在吸附劑中，在清洗步驟后，用其它有機溶劑洗脫分提取物（Chen et al., 2010），操作步驟見圖 1-2。

本研究根據(jù)有機磷農(nóng)藥的共有結(jié)構(gòu)，共設(shè)計了 22 種有機磷農(nóng)藥通用結(jié)構(gòu)半抗原，各半抗原名稱及結(jié)構(gòu)見圖 2-1。Hapten 1~Hapten 20 的連接臂含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，其中 Hapten1 和 Hapten 2 的羧基位于苯環(huán)的間位，Hapten 3 和 Hapten 4 的羧基位于苯環(huán)的對位，Hapten 5 和 Hapten 6 的羧基位于苯環(huán)的鄰位，Hapten 7 和 Hapten 8 的羧基位于苯環(huán)的間位且在苯環(huán)的鄰位有一甲氧基取代基，Hapten 9 和 Hapten 10 的羧基位于苯環(huán)的間位且在苯環(huán)的鄰位有一甲基取代基，Hapten 11 和 Hapten 12 的羧基位于苯環(huán)的間位且在苯環(huán)的對位有一甲基取代基，Hapten 13 和 Hapten 14 的羧基位于苯環(huán)的對位且在苯環(huán)的鄰位有一甲氧基取代基，Hapten 15 和 Hapten 16 的羧基位于苯環(huán)的對位且在苯環(huán)的鄰位有一甲基取代基，Hapten 17 和 Hapten 18 的羧基位于苯環(huán)的對位且在苯環(huán)的間位有一甲基取代基，Hapten 19 和 Hapten 20 的羧基位于苯環(huán)的鄰位且在苯環(huán)的間位有一甲基取代基；Hapten 21 連接臂為 4-氨基丁酸；Hapten 22 的連接臂為 6-氨基己酸。半抗原的合成路線見圖 2-2。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3426667