芒果是一種重要的熱帶水果。炭疽病是危害芒果最嚴重的病害之一,在全球范圍內(nèi)普遍發(fā)生,其中膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides（Penz.）Penz.&Sacc.）是芒果炭疽病的主要病原菌。本實驗以膠孢炭疽菌作為研究對象,在前期研究中對產(chǎn)孢量較少的膠孢炭疽菌菌株進行了轉錄組測序,通過生物信息學分析篩選到一個氨基酸轉運蛋白AAP家族的基因,命名為CgAAP,對其功能進行了初步的研究。得到以下結果:本研究通過PCR及RT-PCR技術擴增了CgAAP的DNA序列及cDNA序列,經(jīng)測序后對該序列分析顯示,CgAAP基因全長1858 bp,有4個內(nèi)含子,cDNA全長1593 bp。CgAAP基因編碼一個530個氨基酸的多肽,分子量約為57.1 kD,等電點pI為6.24,是一個中性蛋白,含有氨基酸滲透酶結構域。為了研究CgAAP基因的功能,構建了CgAAP基因的敲除載體pCB1532-CgAAP和過表達載體CgniaD-ToxA-GFP-CgAAP、互補載體pBARGPE1-Hygro-CgAAP,將敲除載體和過表達載體通過PEG介導轉化的方法轉化到膠孢炭... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

芒果膠孢炭疽菌總RNA提取Fig.1TotalRNAofC.gloeosporioides

海南大學碩士學位論文26圖2CgAAP基因的RT-PCR擴增與PCR擴增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR擴增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果膠孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息學分析使用PCR技術與RT-PCR技術擴增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。經(jīng)測序后對該序列分析顯示，CgAAP基因DNA全長1858bp，有4個內(nèi)含子，cDNA全長1593bp。根據(jù)該基因的編碼區(qū)序列預測了其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，ProtParam在線工具分析表明CgAAP基因編碼一個530個氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量約為5.71×104，等電點Pi=6.24，是一個中性蛋白。SignalP4.1Server預測結果顯示CgAAP基因編碼的蛋白沒有信號肽。用SMART在線預測其結構域顯示，該基因編碼產(chǎn)物具有氨基酸滲透酶（AAP）功能區(qū)域（圖3）。CgAAP與茶樹炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性為100%，在炭疽菌屬中的保守度較高。此外，與大力輪枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性為70.59%，與尖孢鐮刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性為68.54%，與水稻惡苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性為67.18%。圖3CgAAP基因氨基酸滲透酶（AAP）結構域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene

海南大學碩士學位論文26圖2CgAAP基因的RT-PCR擴增與PCR擴增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR擴增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果膠孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息學分析使用PCR技術與RT-PCR技術擴增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。經(jīng)測序后對該序列分析顯示，CgAAP基因DNA全長1858bp，有4個內(nèi)含子，cDNA全長1593bp。根據(jù)該基因的編碼區(qū)序列預測了其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，ProtParam在線工具分析表明CgAAP基因編碼一個530個氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量約為5.71×104，等電點Pi=6.24，是一個中性蛋白。SignalP4.1Server預測結果顯示CgAAP基因編碼的蛋白沒有信號肽。用SMART在線預測其結構域顯示，該基因編碼產(chǎn)物具有氨基酸滲透酶（AAP）功能區(qū)域（圖3）。CgAAP與茶樹炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性為100%，在炭疽菌屬中的保守度較高。此外，與大力輪枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性為70.59%，與尖孢鐮刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性為68.54%，與水稻惡苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性為67.18%。圖3CgAAP基因氨基酸滲透酶（AAP）結構域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene

【參考文獻】：
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