中國梨的栽培面積和產(chǎn)量均居世界首位,但由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）所引起的梨輪紋病在梨主產(chǎn)區(qū)的發(fā)生較為普遍,對梨產(chǎn)量、品質(zhì)構(gòu)成較大威脅,生產(chǎn)上對解決此問題的需求日益迫切。具有弱毒特性的真菌病毒具有潛在的生防價值,本研究以從我國梨輪紋病樣中分離的B.dothidea為材料,開展B.dothidea攜帶病毒多樣性研究,并對新鑒定出的真菌病毒分子生物學(xué)特性進(jìn)行系統(tǒng)性研究,為深入了解來源于B.dothidea中的真菌病毒特性提供新的有用信息和完善真菌病毒分類系統(tǒng)提供試驗支撐,并為梨病害綠色防治提供新的具有生防潛能的真菌病毒資源。主要研究結(jié)果如下:1.葡萄座腔菌病毒的多樣性通過對來源于我國8個省的梨產(chǎn)區(qū)289個B.dothidea菌株的雙鏈RNA（ds RNA）進(jìn)行檢測后,發(fā)現(xiàn)這些菌株在0.8-10.0 kb之間共攜帶有22種不同大小的ds RNA片段,說明這些菌株中攜帶有豐富的ds RNA病毒。其中在5.0-7.5 kbp范圍內(nèi)的ds RNA片段的攜帶率最高,為35.7%。其次為Bd CV1的基因組ds RNA,攜帶率為29.2%,然后是兩條～2.0 kbp ... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：162 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

SsMYRV4介導(dǎo)的病毒在不同營養(yǎng)親和性群體間的傳播模式（Wuetal2017）

葡萄座腔菌病毒多樣性與新型病毒分子生物學(xué)特性研究253.10高通量測序及分析3.10.1高通量測序和cDNA文庫構(gòu)建以兩個混合菌株樣本的總RNA為測序模板，在IlluminaHiSeqXTen測序儀上進(jìn)行測序。兩個樣本分別送至北京百邁客公司（記為樣本1）和上海派森諾公司（記為樣本2）。首先通過使用試劑盒對總RNA進(jìn)行處理以去除真菌核糖體RNA（rRNA），然后再進(jìn)行RNA測序（圖2.1）。圖2.1高通量測序樣品實驗上機(jī)流程Fig.2.1Theflowchartofthedeepsequencing文庫構(gòu)建原理如下圖（圖2.2），得到的原始文庫序列片段為reads，原始數(shù)據(jù)稱為Rowdata在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析之前，首先需確保這些reads有足夠高的質(zhì)量，以保證后續(xù)分析的準(zhǔn)確性。對數(shù)據(jù)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并針對以下方式進(jìn)行過濾：(1)去除含接頭的reads；(2)去除低質(zhì)量的reads，對帶有5%以上的Ns和低于20%（Q20）堿基質(zhì)量值的序列進(jìn)行過濾，以獲得高質(zhì)量的測序序列；經(jīng)過上述一系列質(zhì)量控制之后得到的序列數(shù)據(jù)稱為Cleandata。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆博士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文26圖2.2cDNA文庫構(gòu)建流程Fig2.2TheflowchartofcDNAlibraryconstruction3.10.2宏病毒組生物信息學(xué)分析通過使用本實驗室已有的生物信息分析流程對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行宏病毒組分析�；谟行�(shù)據(jù)（CleanData）進(jìn)行拼接與組裝、物種分類分析和病毒豐度分析（圖2.3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]梨輪紋病發(fā)生規(guī)律及防治措施[J]. 周占兵.  河北果樹. 2018(Z1)
[2]來源于湖北省梨輪紋病菌中真菌病毒多樣性檢測及其分析[J]. 羅慧,胡旺成,王國平,王利平.  植物病理學(xué)報. 2019(01)
[3]梨樹主要病害種類及防治措施[J]. 源朝政,鄭明燕,高小峰,周曉靜,王虹.  農(nóng)業(yè)科技通訊. 2018(07)
[4]7種藥劑防治梨輪紋病、黑星病和黑斑病的效果[J]. 葉長飛,溫莉娜,林永紅,闕祖尚,吳麗萍,柴榮耀.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(02)
[5]43份山東地方梨種質(zhì)資源對枝干輪紋病、腐爛病的抗性評價[J]. 魏樹偉,張勇,王少敏.  落葉果樹. 2016(01)
[6]拮抗放線菌KLBMP06061的鑒定及其對蘋果輪紋病菌的抑菌作用[J]. 周小琪,曹成亮,丁盼,薛羚偉,劉貴友,蔣繼宏.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(12)
[7]梨輪紋病的防治方法[J]. 柴全喜,宋素智.  山西果樹. 2015(04)
[8]合歡內(nèi)生菌H8的分離、鑒定及其抗菌代謝物質(zhì)研究[J]. 曲田麗,張淑穎,金玉蘭.  華北農(nóng)學(xué)報. 2015(01)
[9]梨黑斑病菌拮抗細(xì)菌的篩選鑒定及其拮抗活性的研究[J]. 楊曉蕾,錢國良,范加勤,胡白石,劉鳳權(quán).  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(01)
[10]葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea侵染及其對蘋果果實影響的組織細(xì)胞學(xué)研究[J]. 韓青梅,王婧群,林月莉,高小寧,康振生,黃麗麗.  菌物學(xué)報. 2014(01)

博士論文
[1]葡萄座腔菌侵染蘋果枝條過程研究及一株低致病力菌株中病毒的鑒定[D]. 丁正.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]梨輪紋病與干腐病的病原關(guān)系及輪紋病菌攜帶真菌病毒多樣性研究[D]. 翟立峰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]小核盤菌多樣性、致病力衰退機(jī)制及危害油菜的風(fēng)險研究[D]. 楊丹.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]陜西省蘋果輪紋病病原菌鑒定與多樣性研究[D]. 孫鑫垚.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



本文編號：3408177