由疫霉菌（Phytophthora spp.）造成的作物疫病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的毀滅性病害,嚴重威脅著全球的生態(tài)和糧食安全,給世界經(jīng)濟造成了巨大的損失。由于疫霉菌與植物病原真菌在遺傳學(xué)上的巨大差異,多數(shù)殺菌劑對之無效,目前尚無高效的防治手段。近年來隨著轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)的發(fā)展,培育轉(zhuǎn)基因抗性品種可為現(xiàn)階段防治作物疫病、保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全提供一種有效方案。已知植物病原細菌的核調(diào)控蛋白（nucleomodulins）可進入寄主的細胞核、調(diào)控植物防衛(wèi)相關(guān)基因的表達,是一類非常重要的致病相關(guān)蛋白,但在卵菌中尚無系統(tǒng)研究。鑒于此,本文首次在辣椒疫霉（P.capsici）中開展了以下研究:（1）為了探究這類效應(yīng)蛋白的分布,利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測辣椒疫霉中具有DNA結(jié)合功能域的外泌蛋白。結(jié)果共獲得48個候選蛋白。（2）為了分析候選蛋白是否在辣椒疫霉的侵染過程中發(fā)揮作用,利用熒光實時定量RT-PCR技術(shù),分析了這48個基因在辣椒疫霉生長發(fā)育和侵染階段的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,預(yù)測的大多數(shù)基因（70.83%）在侵染階段上調(diào)表達,說明這些效應(yīng)蛋白響應(yīng)了辣椒疫霉的侵染。（3）為進一步明確候選蛋白在侵染過程中的作用,克隆了兩... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)［５１］??ＴＡＬ效應(yīng)蛋白由三個典型區(qū)域組成：Ｎ端、中心重復(fù)區(qū)域（ＣＲＲ）和Ｃ端

?具有寄主核定位特征的辣椒疫霉效應(yīng)蛋白的預(yù)測、鑒定及應(yīng)用初探???：ｋ：Ｌ?秦?ＩＩ??ＨＤ?ＮＧ?Ｎｌ?ＮＳ?ＮＮ?Ｎ＊?ＨＧ?Ｈ＊?ＩＧ??＞?Ａ?１９?７?５５?２０?７?１?０?０?０??｜?ｃ?Ｃ?６９?１２?５?１０?２?７?２?０?０??＂３?５＂?Ｇ?０?０?０?４?７?０?０?０?０??ｃ?＾?Ｔ?５?５０?０?３?１?１?２?１?１??圖３?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的特異性靶向ＤＮＡ模型ｌ８〇ｌ??人工排列的誘導(dǎo)基因啟動子中ＴＡＬ效應(yīng)蛋白和預(yù)測靶標序列的ＲＶＤｓ，星號表示該重復(fù)類型中缺少第十??三位氨基酸。每種ＲＶＤ出現(xiàn)頻率最高的堿基數(shù)目用粗體標出??３．１．５?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的應(yīng)用??（ｌ）ＴＡＬＥＮ技術(shù)的產(chǎn)生與應(yīng)用??隨著ＴＡＬ效應(yīng)蛋白與靶標基因的識別密碼被破解，以ＴＡＬ效應(yīng)蛋白為基礎(chǔ)的分子生??物學(xué)技術(shù)日益發(fā)展。基于ＴＡＬ效應(yīng)蛋白能夠特異性識別和結(jié)合目的ＤＮＡ序列的特點，對??其附加一個核酸酶就生成／?ＴＡＬＥＮｓ?（ＴＡＬ?ｅｆｆｅｃｔｏｒ?ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）。根據(jù)識別密碼選擇合適的??ＴＡＬＥＮ打靶位點，人工組裝ＲＶＤｓ合成的ＴＡＬ效應(yīng)蛋白，可以精確結(jié)合到中．物瑤因組任??意指定位置。目前己開發(fā)出多個ＴＡＬＥＮ打靶位點的設(shè)計軟件及網(wǎng)站，如ｌｉｔｔｐＳ：／／ｔａｌｅ－ｎｔ．??ｃａｃ．ｃｏｍｅｌｌ．ｅｄｕ／（設(shè)計?ＴＡＬＥＮ）、ｈｔｔｐ：／／ｚｉｆｉｔ．ｐａｒｔｎｅｒｓ．ｏｒｇ／ＺｉＦｉＴ／（設(shè)計?ＴＡＬＥＮ／ＴＡＬＥ）和??ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｔｏｏｌｓ／ｅｐｃｒ／（搜索?ＴＡＬＥＮ?脫祀位點）等【８７］�？紤]到?ＴＡＬ?效應(yīng)蛋白??與靶標

?ＳＰ?ＺＯ?ＧＣ?Ｍｏｃｋ?１．５?：、?６?１：?２４?３６?７２?ｈｐｉ??二?ｉｓｉ?ｂｐ??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?＾??ｂ?０３?ｊ?ｉ?：?ｉ??ｒ??３００??？：???：??????ｉ?２００?：???：?■／■■■＇■■???＼?＼??１００???Ｉ．???■??；?；?；??？??；?：?：?Ｔ７：?：??０?１０?２０?３０?＊０??Ｃｙｃｌｅｓ?Ｌｏｇ?Ｓｃａｌｅ??圖５辣椒疫霉生長發(fā)育及侵染階段的總ＲＮＡ及其ｃＤＮＡ質(zhì)量分析??Ａ：不卜９階段的總ＲＮＡ樣品及內(nèi)參貓因?qū)Γ悖模危吝M行擴增的結(jié)災(zāi)。樣品：ＭＹ，蘭絲；ＳＰ，游動孢子??囊；ＺＯ，游動孢子；ＧＣ，萌發(fā)休止孢；１．５－７２ｈｐｉ，接種辣椒疫霉１．５、３、６、１２、２４、３６、７２?１ｉ／Ｔｉ＿的??本氏煙；Ｍｏｃｋ，接種無菌水的本氏煙。ｇＤＮＡ，辣椒疫霉基因組ＤＮＡ。Ｂ：抓７／基因跨內(nèi)含ｒ引物對??（ｃａｐＷＳ４１Ｆ２／ｃａｐＷＳ４１Ｒ２）對各樣品的熒光定Ｍ?ＰＣＲ擴增曲線??２．２標準曲線的分析??設(shè)置五個濃度梯度，依次將辣椒疫梅坫因組ＤＮＡ稀釋十倍，作為模板。利用４８個候??選基因的引物進行熒光定量ＰＣＲ擴增，制作這些引物對的熒光定量ＰＣＲ標準曲線。結(jié)張??顯示，各標準曲線的線性系數(shù)爐均大于０．９８，斜率Ｋ的范圍在滿足－３．５ＳＫＳ－３的條件下，??引物對的擴增效率Ｅ值均在９０°／。－１２０％的范圍內(nèi)（表３），表明所有熒光定量ＰＣ＇Ｒ引物對具??有較好的擴增效率。此外，所有標準曲線對應(yīng)的熔解曲線均為中．峰．１１．峠值對應(yīng)的溫度在??８０°Ｃ以上，比

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]大豆疫霉三個效應(yīng)子調(diào)控植物免疫反應(yīng)的功能與機制研究[D]. 宋天巧.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]辣椒疫霉效應(yīng)分子編碼基因的克隆及功能分析[D]. 邢玉平.揚州大學(xué) 2015



本文編號：3405739