果膠桿菌屬（Pectobacterium）細(xì)菌是十大植物病原細(xì)菌之一,主要引起植物的黑脛病和軟腐病。果膠桿菌向胞外分泌一系列植物細(xì)胞壁降解酶類（PCWDEs）,如果膠酶、纖維素酶等,是其主要的致病因子。果膠桿菌寄主范圍廣泛,亞種多樣性豐富,然而目前生產(chǎn)上仍缺乏有效的防治措施,選育抗病品種和提高栽培技術(shù)可適當(dāng)減少黑脛病和軟腐病造成的損失。隨著馬鈴薯主糧化的推進(jìn),馬鈴薯在中國的生產(chǎn)面積在不斷擴(kuò)大,馬鈴薯軟腐病和黑脛病將會(huì)成為制約該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要病害。因此,研究果膠桿菌的致病機(jī)制,從而為有效防控馬鈴薯該類病害提供科學(xué)依據(jù),具有深遠(yuǎn)的意義。本實(shí)驗(yàn)室前期研究P.carotovorum subsp.carotovorum菌株P(guān)ccS 1與寄主黃花馬蹄蓮互作時(shí),鑒定了 53個(gè)受寄主誘導(dǎo)的差異表達(dá)蛋白。本文通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)其中11個(gè)蛋白的編碼基因進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄水平的分析,其中共10個(gè)基因在活體互作時(shí)的差異表達(dá)情況與蛋白水平的一致,驗(yàn)證了蛋白差異表達(dá)結(jié)果。為了進(jìn)一步篩選與致病性有關(guān)的蛋白,對(duì)活體互作時(shí)在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均顯著上調(diào)表達(dá)的兩個(gè)蛋白:調(diào)控Pectobacterium和Dickeya中胞外果膠... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖３－１糖類代謝途徑（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途徑??

ｐｙｒｕｖａｔｅ?＝＝＾?ＴＣＡ?ｃｙｃｌｅ??圖３－１糖類代謝途徑（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途徑??ＥＭＰ途徑又稱為糖酵解途徑（ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ），是生物體中最普遍存在的途徑，能夠??把葡萄糖和其他單糖轉(zhuǎn)化成丙酮酸。ＥＭＰ在有無氧氣的條件下均可以進(jìn)行，反應(yīng)主要??分為兩個(gè)階段。第一階段主要是葡萄糖磷酸化形成兩個(gè)三碳的中間產(chǎn)物：磷酸二羥丙??酮和３－磷酸甘油醛。第二階段是磷酸二羥丙酮和３－磷酸甘油醛經(jīng)過氧化還原反應(yīng)形成??２分子的丙酮酸，釋放的能量?jī)?chǔ)存在ＡＴＰ的高能磷酸鍵中，并形成還原力ＮＡＤＨ。在??ＥＭＰ途徑中，磷酸果糖激酶、３－磷酸磷酸甘油酸激酶、丙酮酸激酶是ＥＭＰ途徑中的??關(guān)鍵酶％３］。??３．１．２?ＰＰ?途徑??ＰＰ途徑又稱為己糖單憐酸旁路（ｈｅｘｏｓｅ?ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ?ｓｈｕｔ?ＨＭＳ），是葡萄糖在體??內(nèi)生成５－磷酸核糖的唯一途徑，廣泛分布在好氧和兼性厭氧的微生物中。該途徑也有??兩個(gè)階段反應(yīng)

下篇研究?jī)?nèi)容第一章ｃａｒ加ｏｖｏｒｗｍ菌株ＰｃｃＳｌ中ＫｄｇＲ和ＰｏｔＦＧＨＩ致病相關(guān)功能分析??（６）將制備管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室溫離心１?ｍｉｎ，棄濾液。??（７）將制備管放入收集管，加入７５０?ｐＬ洗脫液（Ｗａｓｈ?Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，使用前確認(rèn)已加入??乙醇），１２０００?ｒｐｍ室溫離心１?ｍｉｎ，棄濾液。??（８）加入２５０?ｐＬ洗脫液，重復(fù)步驟７。??（９）將制備管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室溫離心２ｍｉｎ。??（１０）將制備管小心轉(zhuǎn)移至新的１．５?ｍＬＥＰ管中，室溫干燥５?ｍｉｎ。向制備管中間加入??１００?（ｉＬ?去核酸酶滅菌水（Ｎｕｃｌｅａｓｅ－Ｆｒｅｅ?Ｗａｔｅｒ），室溫賭育?２?ｍｉｎ，?１２０００?ｒｐｍ?室溫??離心２?ｍｉｎ以洗脫質(zhì)粒ＤＮＡ。１．０％瓊脂糖膠電泳檢測(cè)，并將質(zhì)粒ＤＮＡ置于－２０°Ｃ??保存。??２．４敲除突變體砂和ＡｐｏｆＦＧ／／／的構(gòu)建??敲除突變體的構(gòu)建采用同源重組的方法，流程如圖１－１。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]彩色馬蹄蓮細(xì)菌性軟腐病菌的鑒定及其群體感應(yīng)淬滅的研究[J]. 谷春艷,范加勤,楊雪,胡白石,劉鳳權(quán),張永春.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(03)
[2]野油菜黃單胞菌2-酮-3-脫氧-6-磷酸葡萄糖酸醛縮酶基因的突變分析[J]. 譚旖寧,彭方印,安世琦,陸光濤,何勇強(qiáng),唐紀(jì)良.  廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2008(04)
[3]古菌獨(dú)特的脫氧酮糖酸（ED）葡萄糖酵解途徑[J]. 劉天明,申玉龍,劉慶軍,劉波.  微生物學(xué)報(bào). 2008(08)
[4]軟腐歐氏桿菌在離體條件下產(chǎn)生胞外酶的比較研究[J]. 王金生,張學(xué)君,方中達(dá).  植物病理學(xué)報(bào). 1989(04)

碩士論文
[1]胡蘿卜軟腐果膠桿菌致病相關(guān)基因的篩選及功能分析[D]. 杜碩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]胡蘿卜軟腐果膠桿菌與黃花馬蹄蓮不同方式互作的蛋白比較分析及相應(yīng)致病基因的研究[D]. 楊鐘靈.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3405046