煙草叢頂病是由番茄叢矮病毒科（Tombusviridae）幽影病毒屬（Umbravirus）成員煙草叢頂病毒（Tobacco bushy top virus,TBTV）和黃癥病毒科（Luteoviridae）成員煙草扭脈病毒（Tobacco vein distorting virus,TVDV）復(fù)合侵染引起的一種系統(tǒng)性侵染病害。TBTV基因組為一條正義單鏈RNA,全長(zhǎng)4,152個(gè)核苷酸,5’端沒(méi)有帽子,3’端沒(méi)有poly（A）尾,共有4個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF）。ORF1編碼35 KDa蛋白,ORF1的C末端與ORF2的N端有8個(gè)密碼子的重疊區(qū),ORF2編碼63 KDa蛋白。ORF1通過(guò)-1位的移碼翻譯機(jī)制表達(dá)產(chǎn)生TBTV RNA依賴的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）,其分子量約等于ORF1和ORF2的分子量之和。本研究在已經(jīng)完成TBTV RdRp-1位移碼翻譯表達(dá)的定性分析基礎(chǔ)上,主要對(duì)TBTV RdRp的-1位移碼翻譯機(jī)制的多層次調(diào)控元件進(jìn)行定位和結(jié)構(gòu)特征分析。首先通過(guò)序列分析,初步定位了-1型移碼必需的七核苷酸滑動(dòng)序列（特征為:XXx... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

RNA病毒采用的常規(guī)和非常規(guī)翻譯機(jī)制示意圖(FirthandBrierley,2012)

Hentze et al., 1997; Le et al., 1997; Dreher and Miller, 2006; Wang et al., 2009）。翻譯過(guò)程包括四個(gè)步驟：翻譯的起始，蛋白的延伸，翻譯的終止，以及核糖體的再循環(huán)(圖 1-2)。圖1-2 真核生物mRNA的翻譯機(jī)制示意圖（Dreher and Miller, 2006）Fig.1-2 Translational mechanism in eukaryotic mRNAs.1.2.1 翻譯的起始真核生物的蛋白翻譯起始是由許多翻譯起始因子（eIF）調(diào)控的。首先是翻譯起始因子（eIF）4E 識(shí)別并結(jié)合 5’端帽子結(jié)構(gòu)然后招募 eIF4G，繼續(xù)結(jié)合 eIF4A、eIF4B 以及poly（A）結(jié)合蛋白（PABP），最終使得 mRNA 連同核糖體形成一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)復(fù)合體。核糖體 40S 亞基與各種翻譯起始因子 eIF3，eIF1，eIF1A，eIF5 以及 eIF2-Met-tRNAi-GTP結(jié)合形成 43S 核糖體復(fù)合物。在翻譯起始因子 eIF4G 和 eIF3 的作用下，43S 核糖體復(fù)合物與環(huán)狀結(jié)構(gòu)復(fù)合體結(jié)合，核糖體被招募到 mRNA 的 5’端并在解旋酶 eIF4A 和輔助因子 eIF4B 的作用下沿 mRNA 的 5’→3’方向滑動(dòng)

圖1-3四種不同類(lèi)型的IRES元件（Jeffrey, 2008）Fig.1-3 Four different IRES groups.1.3.2 滲漏掃描（Leaky scanning）策略滲漏掃描是一種翻譯同一條 mRNA 鏈上具有重疊區(qū)開(kāi)放閱讀框（O立的兩個(gè)蛋白時(shí)發(fā)生的翻譯機(jī)制。在蛋白翻譯的起始階段，40S 核糖體亞的帽子結(jié)構(gòu)之后，會(huì)沿著 mRNA 從 5’端往 3’端方向掃描，直到遇到起始開(kāi)始翻譯（Kozak, 2002）。但是在有些情況下，會(huì)有一定比例的核糖體在始密碼子時(shí)不發(fā)生翻譯的起始，而是繼續(xù)向 3’端方向滑動(dòng)，直到遇到后面才開(kāi)始進(jìn)行翻譯（Kozak, 2002）（圖 1-4），這種翻譯的起始機(jī)制便是滲掃描的最終結(jié)果是表達(dá)兩個(gè)相互獨(dú)立的蛋白，這兩個(gè)蛋白可以是 C 末端重開(kāi)放閱讀框中的不同起始位點(diǎn)），可以是兩個(gè)有重疊區(qū)的 ORF（不同的也可以是兩個(gè)沒(méi)有重疊區(qū)而是順序性的開(kāi)放閱讀框（Andrew E. Firth a

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]煙草叢頂病毒（TBTV）ORF3和ORF4的原核表達(dá)、抗血清制備及應(yīng)用[J]. 龍亞芹,王萬(wàn)東,左瑞娟,李凡,尹朝先,陳海如.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2011(02)
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