新陳代謝是生命體生命活動(dòng)的基礎(chǔ),是物質(zhì)代謝和能量代謝的結(jié)合。微孢子蟲(chóng)是細(xì)胞內(nèi)寄生的真核生物,宿主域廣泛,寄生環(huán)境的復(fù)雜多樣使得不同種屬的微孢子蟲(chóng)的代謝情況存在很大的差異。對(duì)微孢子蟲(chóng)的基因組分析發(fā)現(xiàn)其基因組中編碼蛋白的序列在長(zhǎng)度和數(shù)量上都有著很大程度的縮減,尤其是與代謝相關(guān)的基因,因此微孢子蟲(chóng)的代謝研究一直是學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。對(duì)家蠶微孢子蟲(chóng)的基因組分析發(fā)現(xiàn)家蠶微孢子蟲(chóng)擁有完整的糖酵解途徑,能夠通過(guò)該途徑獲取生命活動(dòng)所需的部分能量。烯醇化酶（Enolase,ENO）是糖酵解過(guò)程中的限速酶,對(duì)烯醇化酶的研究能夠?yàn)槲覀兏玫亓私馕㈡咦酉x(chóng)的能量代謝提供一定的基礎(chǔ)。且近年來(lái)也有烯醇化酶新的功能的發(fā)現(xiàn)報(bào)道,因此烯醇化酶在家蠶微孢子蟲(chóng)的生命活動(dòng)中是否參與到其他的過(guò)程當(dāng)中也是我們關(guān)注的問(wèn)題。本研究依據(jù)微孢子蟲(chóng)數(shù)據(jù)庫(kù)中家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶的編碼序列設(shè)計(jì)引物,以家蠶微孢子蟲(chóng)DNA為模板PCR擴(kuò)增獲得家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶基因NbENO。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示該基因ORF全長(zhǎng)1239 bp,編碼413個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量46.323 kD,等電點(diǎn)6.13;蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α螺旋（28.33%）、延伸片... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 微孢子蟲(chóng)的研究進(jìn)展
        1.1.1 微孢子蟲(chóng)概述
        1.1.2 微孢子蟲(chóng)的基因組學(xué)研究
        1.1.3 微孢子蟲(chóng)蛋白質(zhì)的研究
        1.1.4 微孢子蟲(chóng)代謝的研究
    1.2 烯醇化酶的研究進(jìn)展
    1.3 研究意義及內(nèi)容
    1.4 研究路線
第2章 家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶基因NbENO的克隆與序列分析
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.3 主要試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 家蠶微孢子蟲(chóng)基因組ＤＮＡ的提取
        2.3.2 家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶基因NbENO的克隆
        2.3.3 制備大腸埃希氏菌Top 10 感受態(tài)細(xì)胞
        2.3.4 重組質(zhì)粒pMD-19T-NbENO的構(gòu)建及序列測(cè)序
        2.3.5 烯醇化酶基因NbENO及編碼蛋白的生物信息學(xué)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶基因NbENO的克隆
        2.4.2 NbENO基因及蛋白序列分析
    2.5 討論
第3章 家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶NbENO的原核表達(dá)以及抗體制備
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 主要儀器設(shè)備
        3.2.3 主要試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 NbENO基因的擴(kuò)增
        3.3.2 原核表達(dá)載體pET-28a-NbENO的構(gòu)建及鑒定
        3.3.3 NbENO重組蛋白的表達(dá)與鑒定
        3.3.4 重組蛋白NbENO的表達(dá)純化
        3.3.5 NbENO多克隆抗體的制備
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 原核表達(dá)載體pET-28a-NbENO的構(gòu)建及鑒定
        3.4.2 NbENO重組蛋白的表達(dá)與鑒定及純化
        3.4.3 重組蛋白NbENO多克隆抗體的制備
    3.5 討論
第4章 家蠶微孢子蟲(chóng)NbENO在侵染家蠶過(guò)程中的表達(dá)特征分析
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 主要儀器設(shè)備
        4.2.3 主要試劑配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 家蠶微孢子蟲(chóng)感染家蠶后不同時(shí)間點(diǎn)的中場(chǎng)組織取樣
        4.3.2 家蠶微孢子蟲(chóng)感染家蠶BmN細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)取樣
        4.3.3 家蠶微孢子蟲(chóng)感染樣品的總RNA提取
        4.3.4 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        4.3.5 NbENO不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況檢測(cè)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 NbENO表達(dá)的半定量檢測(cè)
        4.4.2 NbENO在家蠶微孢子蟲(chóng)侵染家蠶的不同時(shí)期的表達(dá)情況分析
    4.5 討論
第5章 家蠶微孢子蟲(chóng)烯醇化酶NbENO的亞細(xì)胞定位
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 材料與試劑
        5.2.2 主要儀器設(shè)備
        5.2.3 主要試劑配制
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 家蠶微孢子蟲(chóng)的Percoll純化
        5.3.2 家蠶微孢子蟲(chóng)發(fā)芽處理
        5.3.3 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 家蠶微孢子蟲(chóng)的Percoll純化與發(fā)芽處理
        5.4.2 NbENO在家蠶微孢子蟲(chóng)孢子中的間接免疫熒光定位
    5.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]烯醇化酶1的生物學(xué)功能[J]. 姜冬梅,康波,馬容,何琿.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2014(01)
[4]溫度對(duì)家蠶微孢子蟲(chóng)（Nosema bombycis）孢子體外發(fā)芽的影響[J]. 黃旭華,朱方容,潘志新,湯慶坤,羅梅蘭,羅堅(jiān),陳小青,黃深惠.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(06)
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[6]一種快速高效制備家蠶微孢子蟲(chóng)基因組DNA和總蛋白的方法[J]. 蔡順風(fēng),何欣怡,何祥康,邱海洪,李光才,何永強(qiáng),魯興萌.  蠶業(yè)科學(xué). 2011(06)
[7]微孢子蟲(chóng)蛋白質(zhì)及其與宿主互作的研究進(jìn)展[J]. 吳正理,李艷紅,宋元達(dá).  蠶業(yè)科學(xué). 2009(04)
[8]家蠶微孢子蟲(chóng)在家蠶胚胎細(xì)胞系BmE-SWU1中的極絲彈出情況[J]. 李艷紅,吳正理,潘國(guó)慶,龐敏,胡軍華,張瑞芝,周澤揚(yáng).  動(dòng)物學(xué)報(bào). 2007(06)
[9]家蠶微孢子蟲(chóng)N.bombycis分離純化方法的優(yōu)化[J]. 周成,潘國(guó)慶,萬(wàn)永繼,周澤揚(yáng).  蠶學(xué)通訊. 2002(01)

博士論文
[1]家蠶微孢子蟲(chóng)（Nosema bombycis）功能基因組研究[D]. 林立鵬.西南大學(xué) 2012

碩士論文
[1]家蠶微孢子蟲(chóng)（Nosema bombycis）功能基因組研究[D]. 馬成.西南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3352932