水稻白葉枯病菌Xoo（Xanthomonas oryzfae pv.oryzae,Xoo）能利用Ⅲ型分泌系統(tǒng)T3SS（Typethreesecretionsyetem）向細胞外分泌效應(yīng)因子,從而表現(xiàn)出水稻白葉枯病菌的毒性。轉(zhuǎn)位子是Ⅲ型分泌系統(tǒng)的重要組分,位于Ⅲ型分泌系統(tǒng)裝置頂端,通常由兩個疏水性轉(zhuǎn)位子蛋白和一個親水性轉(zhuǎn)位子蛋白組成。有研究顯示,水稻白葉枯病菌Xoo的親水性轉(zhuǎn)位子蛋白Hpa1xoo和疏水性轉(zhuǎn)位子蛋白HrpFxoo是Ⅲ型分泌系統(tǒng)的重要組分,它們影響著水稻白葉枯病菌PX099A在水稻上的致病性。因此使用GAL4和膜酵母雙雜交系統(tǒng)驗證Hpa1xoo和HrpFxoo兩者間是否存在直接互作,結(jié)果表明,兩種蛋白之間并不存在直接互作。設(shè)計實驗將hpa1和hrpF基因分別連接到表達載體pHM1上,并在設(shè)計hpa1引物時加上flag標簽,在設(shè)計hrpF引物時加上his標簽,通過Western bloting實驗顯示蛋白表達正確。之后分別通過Hpa1-Flag蛋白和HrpF-His蛋白在PXO99A總蛋白中進行免疫共沉淀（CO-IP）實驗,然后將免疫沉淀的互作結(jié)合蛋白樣品送公司進行質(zhì)譜鑒定。... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能解析（Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｔａｌ．，２０１３）??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴＡＬ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｐｒｏｔｅｉｎ??

２?ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的研究進展??２．１?ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的起源和特征??在黃單胞菌三型分泌系統(tǒng)分泌的效應(yīng)因子中，通過基因組測序后結(jié)果的對比分發(fā)現(xiàn)，還存在一些ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)因子的類型（Ｚｈａｏｅｔａｌ．，２０１３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)因在于絕大多數(shù)的黃單胞菌屬中，主要由分泌或者信號轉(zhuǎn)運區(qū)（ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ／ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｉｇｎａｌ）和特異功能結(jié)構(gòu)域（ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｄｏｍａｉｎ）兩部分組成（圖２－３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)一般具有下列共同的特征：Ｉ．啟動子區(qū)域存在ＨｒｐＸ特異性結(jié)合位點ＰＩＰ－ｂｏｘ和－１序列（ＴＴＣＧＢ－Ｎ１５－ＴＴＣＧＢ－Ｎ３０－３２－ＹＡＮＮＲＴ）?，?Ｂ?代表?Ｃ、Ｇ?或者?Ｔ；Ｙ?代表?Ｃ?；Ｒ代表Ａ、Ｇ或者Ｔ），通常受ＨｒｐＸ蛋白的調(diào)控；２．分泌信號區(qū)是由位于Ｎ＿端５０個特定氨基酸組成的，位于Ｎ－端的分泌信號肽和ｍＲＮＡ序列的特征成為了對ｎｏＴＡＬ?效應(yīng)蛋白鑒定研究的依據(jù)?（趙帥，２０１１）?。?通過這些典型的特點，?研究人員在胞菌中鑒定了大量的ｎｏｎ－ＴＡＬ效應(yīng)蛋白，尤其是Ｘｃｃ中（Ｊｉａｎｇ?ｅｔａｌ．?，２００６）。??通過對Ｘｏｏ和Ａｂｅ？菌株基因組序列對比分析，發(fā)現(xiàn)不同的菌株中包含著數(shù)量不?ｎｏｎ－ＴＡＬ?蛋白，在義〇〇?的?ＭＡＦＦ３１１０１８、ＫＡＣＣ１０３３１、ＰＸ０９９Ａ＊分別有?２４、１９、??

ｐＧＢＫＴ７、ｐＧＡＤＴ７中�！罢T餌”蛋白Ｘ克隆ＢＤ載體中，表達ＢＤ／Ｘ融合蛋白；待測??試蛋白Ｙ克隆到ＡＤ載體中，表達ＡＤ／Ｙ融合蛋白，如果Ｘ蛋白與Ｙ蛋白之間有作??用，則ＤＮＡ－ＢＤ和ＡＤ同樣被連在一起，激活下游基因的轉(zhuǎn)錄，表達報告基因（圖１－??１）?〇??（￣Ｂａｊｔ?ｙ￣Ｌｉｂｒａｒｙ??Ｖ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐｒ〇ｔｅｉｎ??＾??ＧＡＬＵＡＳ?ｍｉｎｉｍａｌ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?［??圖１－１酵母ＧＡＬ４系統(tǒng)雙雜交原理圖（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，２００７）??Ｆｉｇ．?１－１．Ｔｈｅ?ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ＧＡＬ４?ｓｙｓｔｅｍ??１．１３．２?ＬｉＡｃ介導(dǎo)的酵母轉(zhuǎn)化法??（１）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]水稻白葉枯病菌Ⅲ型效應(yīng)物基因hpaF與毒力相關(guān)[J]. 劉國芳,蔣蓉,蘇輝昭,牛祥娜,玉延華,姜偉,何勇強.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2015(05)
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[5]植物病原菌黃單胞菌的分類研究進展[J]. 龍海,李一農(nóng),李芳榮,徐浪.  植物保護. 2010(05)
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博士論文
[1]Harpins蛋白誘導(dǎo)植物生長和防衛(wèi)的信號傳導(dǎo)交叉調(diào)控及植物互作因子的研究[D]. 任秀艷.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[2]水稻黃單胞菌遺傳操作體系的建立及hrp基因和avrBs3/pthA家族基因的功能研究[D]. 鄒麗芳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]水稻白葉枯病菌XopP/Q和Hpa1蛋白病理功能與植物防衛(wèi)反應(yīng)研究[D]. 高蓉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]水稻細條斑病菌harpinXooc蛋白功能域研究[D]. 郭曉靜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3340441