葡萄是世界四大水果之一,具有很高的經(jīng)濟價值。現(xiàn)廣泛栽培的歐洲種葡萄（Vitis vinifera L.）抗病性較差,其品質(zhì)和產(chǎn)量易受影響。隨著我國設(shè)施葡萄栽培面積的持續(xù)增加,灰霉病成為影響葡萄品質(zhì)和產(chǎn)量的一種主要病害。研究發(fā)現(xiàn),茉莉素在植物響應(yīng)腐生型病原菌侵染的過程中發(fā)揮著重要的作用。JAZ蛋白家族作為茉莉素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的重要元件,廣泛參與調(diào)控由茉莉素所介導(dǎo)的生理反應(yīng)。目前對于JAZ蛋白的研究主要集中在模式植物擬南芥中,而有關(guān)葡萄JAZ蛋白的研究還很少。本研究從抗灰霉病的中國野生山葡萄（Vitis amurensis）‘雙優(yōu)’中同源克隆了VaJAZ9基因及它的啟動子,分析明確了該基因的特性和表達模式,并利用酵母雙雜交技術(shù)篩選了互作蛋白,并進行了驗證;構(gòu)建了VaJAZ9基因的超表達和敲除載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化了歐洲葡萄無核白,獲得轉(zhuǎn)基因葡萄植株。取得的主要結(jié)果如下:1.VaJAZ9基因全長807 bp,編碼268個氨基酸,生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),在其氨基酸序列的中部及C端分別含有一個典型的TIFY/ZIM和Jas保守結(jié)構(gòu)域。VaJAZ9與擬南芥At JAZ1/2、番茄Sl JAZ2親緣... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

茉莉素感知與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模式圖(WasternackandHause2013)

也都依賴Jas結(jié)構(gòu)域的存在，包括MYC2/3/4，MYB21/24，赤霉素抑制子RGA、GAI，乙烯響應(yīng)因子EIN3/EIL1等(PauwelsandGoossens2011)。其二是位于JAZ蛋白中部的ZIM結(jié)構(gòu)域，它含有一段高度保守TIF[F/Y]XG基序。在靜息狀態(tài)下，該結(jié)構(gòu)域能夠與連接蛋白NINJA的C端結(jié)構(gòu)域相結(jié)合，招募協(xié)助完成對JAs響應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄抑制。同時，ZIM結(jié)構(gòu)域還可以調(diào)控JAZ蛋白家族成員之間的二聚化作用(Pauwelsetal.2010;ChungandHowe2009;Vanholmeetal.2007)。另外，在JAZ蛋白的N端還包括有一個由32個氨基酸組成的NT結(jié)構(gòu)域，但有關(guān)其具體的功能還尚未明確（圖1-2）。圖1-2擬南芥JAZ1蛋白及其結(jié)構(gòu)域模式圖Figure1-2SchematicrepresentationoftheJAZ1proteininArabidopsisanditsconserveddomains1.5JAZ蛋白的生物學(xué)功能1.5.1JAZ蛋白與植物生長發(fā)育越來越多的研究發(fā)現(xiàn)JAZ蛋白參與植物的生長發(fā)育進程。酵母雙雜交篩選表明，擬南芥JAZ1、JAZ8和JAZ11蛋白可以直接與控制可育性的關(guān)鍵元件R2R3-MYB類轉(zhuǎn)錄因子（MYB21和MYB24）相互作用，調(diào)控由JAs信號介導(dǎo)的雄蕊發(fā)育及成熟過程(Songetal.2011)。Sehr等（2010）結(jié)合轉(zhuǎn)錄組和組織化學(xué)染色分析發(fā)現(xiàn)，COI1-JAZ7/JAZ10-MYC2是參與擬南芥芽內(nèi)形成層的產(chǎn)生和維管組織的二次生長的核心組分。多個JAZ蛋白（JAZ2、JAZ4以及JAZ8-10）可與控制根毛伸長的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子RHD6和RSL1相互作用，進而調(diào)控下游根毛發(fā)育相關(guān)基因的表達，此研究不僅證實了茉莉素可以促進植物根毛伸長，而且進一步揭示了二者之間作用的分子機理(Hanetal.2020)。Zhai等（2015）發(fā)現(xiàn)部分JAZ蛋白可以結(jié)合AP2/ERF類轉(zhuǎn)錄因子TOE1和TOE2，在植物遭受環(huán)境脅迫時，JAs信號激活后誘發(fā)JAZ蛋白降解，釋放TOEs，

第三章結(jié)果與分析19第三章結(jié)果與分析3.1VaJAZ9基因的克隆與生物信息學(xué)分析根據(jù)葡萄基因組網(wǎng)站和NCBI數(shù)據(jù)庫對歐洲葡萄‘黑比諾’JAZ9基因（Accessionnumber:XM_002277121）的注釋信息，設(shè)計特異性引物并進行PCR擴增，成功克隆了山葡萄‘雙優(yōu)’中VaJAZ9基因全長序列，克隆結(jié)果如圖3-1所示。圖3-1葡萄VaJAZ9基因的克攏泳道M：DNAmarkerDL2000；泳道1，2：VaJAZ9。Fig.3-1GenecloningofVaJAZ9.LaneM:DNAmarkerDL2000;Lane1,2:VaJAZ9.測序結(jié)果表明，VaJAZ9基因全長807bp，編碼268個氨基酸。序列比對發(fā)現(xiàn)，VaJAZ9與歐洲葡萄VvJAZ9存在4個堿基的差異，核苷酸相似度為99.5%（圖3-2）。圖3-2中國野生山葡萄VaJAZ9與歐洲葡萄VvJAZ9基因cDNA序列比對。Fig.3-2ThesequencealignmentofJAZ9geneinVitisamurensisandVitisvinifera.90VaJAZ990VvJAZ9AATTGGTTCCGGAAGGCCTTCCCCTTCCGGGGAATTAATTTTGGCCAAGGAACCTTCCCCGGGGAAAAGGGGTTTTTTAACCCCGGGGGGCCAAGGAAGGAAGGCCGGCCCCGGGGCCGGAAGGGGGGGGAACCCCGGGGAAGGAAAAGGTTCCGGAAGGTTTTTTCCTTCCGGCCAAGG180VaJAZ9180VvJAZ9AACCGGTTGGCCAAGGTTCCTTGGTTTTGGAAGGCCCCAAAATTAACCAATTAAAAAAAAGGAAGGAA

【參考文獻】：
博士論文
[1]中國野生葡萄種質(zhì)葉片抗灰霉病的機制研究[D]. 萬然.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]無核白葡萄體細胞胚再生體系建立與轉(zhuǎn)基因研究[D]. 周起.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號：3337197