稻曲病是一種由稻曲病菌侵染引起的水稻穗部病害,近年來在我國發(fā)生日趨嚴(yán)重。稻曲病不僅影響水稻的產(chǎn)量和品質(zhì),而且在侵染過程中能夠產(chǎn)生毒素,對人和動物的健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。因此,稻曲病的防控是我國水稻生產(chǎn)的重要課題之一。本研究以稻曲病菌侵染階段分泌的效應(yīng)子為試驗材料,在前期研究基礎(chǔ)上,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物瞬時表達(dá)系統(tǒng)從預(yù)測的候選效應(yīng)子中篩選能夠抑制Bax引起的程序性細(xì)胞死亡（PCD）或者能夠誘發(fā)過敏性壞死反應(yīng)（HR）的效應(yīng)子。本研究共篩選到12個能夠抑制Bax引起壞死的效應(yīng)子,其中3個表現(xiàn)為全長可以抑制,而缺失信號肽不能抑制;8個則為全長不能抑制壞死,信號肽缺失可以抑制壞死;另一個效應(yīng)子GME₃212全長和缺失信號肽都可以抑制壞死。信號肽分泌功能驗證表明,除GME₃186外,其余11個候選效應(yīng)子的信號肽均具有分泌功能。辣椒疫霉侵染試驗結(jié)果表明,可以抑制壞死的效應(yīng)子多數(shù)可促進(jìn)病原菌的侵染。同時發(fā)現(xiàn)GME₅236能夠引起細(xì)胞壞死,亞細(xì)胞定位顯示其有可能定位于葉綠體上,并且可以促進(jìn)辣椒疫霉的侵染。序列分析表明GME₅

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物免疫系統(tǒng)的“zigzag”模型(JonesandDangl2006)

圖 2-1 PVX 瞬時表達(dá)載體構(gòu)建示意圖Fig. 2-1 PVX transient expression vector construction diagram的克隆擴(kuò)增候選效應(yīng)子編碼基因的引物詳見附表 1，以被稻曲病 cDNA 為模板擴(kuò)增目的基因。體系(25 μl)： 0.5 μl primer(10mM) 0.5 μlprimer(10mM) 0.5 μldNTPs 0.5 μl Buffer 2.5 μl0.3 μl20.2 μl程序：

Bax 是小鼠促凋亡蛋白，在本氏煙葉片上瞬時表達(dá)可以誘發(fā)本氏煙葉片的程序性細(xì)胞死亡(Programmed Cell Death, PCD)。本研究目的是通過本氏煙瞬時表達(dá)系統(tǒng)鑒定可以引起細(xì)胞死亡的效應(yīng)子，或可以抑制 Bax 引起的細(xì)胞死亡的效應(yīng)子。首先采用電擊轉(zhuǎn)化法將PVX瞬時表達(dá)載體(25個全長，25個信號肽缺失突變體)轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中，并通過農(nóng)桿菌滲透法在煙草葉片上表達(dá)，24h 后在以同樣的方法在相同接種區(qū)域表達(dá) BAX，篩選出可以抑制或引起細(xì)胞死亡的效應(yīng)子。結(jié)果顯示，在候選的 25 個效應(yīng)子及其信號肽缺失突變體中，有 3 個效應(yīng)子表現(xiàn)為全長可以抑制細(xì)胞死亡，而信號肽缺失突變體則不能抑制，分別為 GME_4848、GME_7290、GME_8464；有 8 個效應(yīng)子則相反，表現(xiàn)為信號肽缺失突變體可以抑制細(xì)胞死亡，而全長則不能抑制，分別為 GME_1512、GME_2053、GME_3093、GME_3186、GME_5236、GME_5291、GME_7123、GME_10053；還有 1 個效應(yīng)子GME_3212 的試驗結(jié)果表現(xiàn)為全長和信號肽缺失突變體都可以抑制細(xì)胞死亡。此外發(fā)現(xiàn)全長的 GME_5236 可以引起細(xì)胞死亡，但時間比 Bax 更長，需要 5d 左右。誘發(fā)的死亡也相對比 Bax 弱(表 2-2)。


本文編號：3318479