家蠶二分濃核病毒（Bombyx mori bidensovirus,BmBDV）是2012年國際病毒分類委員會(huì)（ICTV）新設(shè)立的二分DNA病毒科中的唯一病毒種。BmBDV是一種侵染家蠶中腸柱狀細(xì)胞的病原,可引發(fā)家蠶罹患類似昆蟲濃核癥。其基因組由兩條線性ssDNA分子組成（VD1;VD2）,并分別獨(dú)立包裝于不同的病毒衣殼中。VD1中分別編碼主要衣殼蛋白（MCP）與DNA聚合酶（pPolB）的基因中3’端非翻譯區(qū)部分相互重疊,形成了一個(gè)雙功能加尾信號(hào)（BDVpA）,發(fā)揮著轉(zhuǎn)錄后修飾及有效終止蛋白表達(dá)的作用。在本研究中我們?cè)u(píng)估了這段簡短的BDVpA序列對(duì)外源基因表達(dá)調(diào)控的影響。熒光顯微技術(shù)檢測可視化蛋白GFP的表達(dá),定性分析BDVpA（63）與SV40polyA活性的強(qiáng)弱。構(gòu)建以包含重疊區(qū)的BDVpA（63）為多聚腺苷酸化信號(hào)的gfp瞬時(shí)表達(dá)質(zhì)粒（pT-p5-gfp-BDVp A（63）和pT-ie1-gfp-BDVp A（63））,并構(gòu)建無polyA的gfp瞬時(shí)質(zhì)粒作為陰性對(duì)照組。分別轉(zhuǎn)染三種昆蟲細(xì)胞（Hi5、BmN和Sf9）,熒光倒置顯微鏡觀測細(xì)胞內(nèi)的熒光。含有BDVpA（63）的轉(zhuǎn)染... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BmBDV基因組VD1的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（引自王永杰）

圖 1.3 多聚腺苷酸化的過程Fig1.3 The process of polyadenylation.3.2 多聚腺苷酸化的調(diào)控機(jī)制目前研究比較透徹的主要是真核基因的多聚腺苷酸化，含有多個(gè) polyA 位近端的 polyA 位點(diǎn)在基因的外顯子或者內(nèi)含子上，則形成的轉(zhuǎn)錄本會(huì)缺失近 polyA 位點(diǎn)與遠(yuǎn)端的 polyA 間的內(nèi)含子與外顯子區(qū)域。當(dāng)近端 polyA 位點(diǎn)位’UTRs 時(shí)，則產(chǎn)生具有不同長度 3’UTRs 的 mRNA 轉(zhuǎn)錄本，但編碼相同的蛋1]。此外，有關(guān)研究還發(fā)現(xiàn) polyA 位點(diǎn)附近的 DNA 甲基化的狀態(tài)可能與多聚酸化 polyA 位點(diǎn)的選擇有關(guān)，但其具體的調(diào)控機(jī)制有待深入研究[48]。影響多聚腺苷酸化調(diào)控機(jī)制的因素主要分為以下三類：特異性 polyA 因子為 polyA 位點(diǎn)選擇的核心調(diào)節(jié)因子，但一些蛋白因子和輔助序列也對(duì) polyA

于昆蟲轉(zhuǎn)基因載體中，尤其是 piggyBac 轉(zhuǎn)座載體限廣泛，對(duì)生產(chǎn)外源蛋白及分子育種等方面的研究有著轉(zhuǎn)基因載體外，作為四大表達(dá)系統(tǒng)之一的昆蟲桿狀病動(dòng)物的病毒的加尾信號(hào) SV40 polyA，在多角體啟動(dòng)白。目前 Bac-to-Bac 表達(dá)系統(tǒng)運(yùn)用最為廣泛，改變了可在昆蟲細(xì)胞內(nèi)表達(dá)外源蛋白[67]。陸續(xù)出現(xiàn)的多聚腺苷酸化信號(hào)如 HSVtk polyA（單純 polyA（人工合成的人源化生長因子）、sNRP-1 polyA被運(yùn)用于克隆或者病毒載體的構(gòu)建[68]。但是這些多哺乳動(dòng)物有關(guān)，可能在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)外源基因存在成潛在的影響。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家蠶二分濃核病毒感染家蠶后的釋放動(dòng)態(tài)研究[J]. 胡朝陽,張曉龍,張清,劉偉,李國輝,姚勤.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(02)
[2]蛋白質(zhì)起始的DNA病毒復(fù)制機(jī)制[J]. 邢亞麗,司亞運(yùn),袁弋,張清,姚勤,陳克平.  微生物學(xué)雜志. 2015(03)
[3]可選擇性多聚腺苷酸化的生物學(xué)功能[J]. 楊亮,張紅星,崔英,周鋼橋.  軍事醫(yī)學(xué). 2015(05)
[4]家蠶二分濃核病毒在家蠶細(xì)胞中的體外拯救[J]. 張苗苗,馬瑛,潘曉利,胡朝陽,李國輝,司亞運(yùn),邢亞麗,陳克平,姚勤.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(01)
[5]家蠶二分濃核病毒DNA聚合酶基因啟動(dòng)子P97的研究[J]. 馬瑛,呂鵬,張苗苗,胡朝陽,李國輝,陳克平,姚勤.  蠶業(yè)科學(xué). 2013(04)
[6]家蠶二分濃核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表達(dá)和抗體制備[J]. 李國輝,王鵬,胡朝陽,姚勤.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(11)
[7]雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 耿德玉,原媛,郭華榮.  科技資訊. 2012(21)
[8]家蠶細(xì)小病毒樣病毒的研究進(jìn)展[J]. 李光田,郭旭麗,朱守林,馬瑛,胡朝陽,李國輝,陳克平,姚勤.  生命科學(xué). 2012(03)
[9]SV40 PolyA序列及其AATAAA信號(hào)對(duì)上游GFP基因表達(dá)及轉(zhuǎn)錄終止的影響[J]. 李書平,馮晶晶,王紅鋼,王秀芳,呂占軍.  遺傳. 2012(01)
[10]家蠶濃核病毒BmDNV-3（中國株）VD1基因組結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)錄分析[J]. 王永杰,姚勤,陳克平,韓序.  生物工程學(xué)報(bào). 2006(05)

碩士論文
[1]家蠶二分濃核病毒感染的家蠶連續(xù)病理變化研究[D]. 張曉龍.江蘇大學(xué) 2016
[2]家蠶二分濃核病毒線性化基因組的拯救與重組病毒的研究[D]. 張盼盼.江蘇大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3316794