南方水稻黑條矮縮病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）由介體白背飛虱傳播,不經(jīng)卵傳播。SRBSDV編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1、P6和P9-1是病毒復(fù)制和裝配的場(chǎng)所—病毒原質(zhì)（viroplasm）的組分。這三種非結(jié)構(gòu)蛋白在病毒的復(fù)制過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的作用。已知P6能分別與P5-1和P9-1互作,而P5-1和P9-1不能互作,那么這三種非結(jié)構(gòu)蛋白在病毒原質(zhì)的形成過(guò)程中是否由某一個(gè)蛋白起著決定性的作用,需要我們深入的研究。本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)免疫熒光標(biāo)記技術(shù)在介體白背飛虱培養(yǎng)細(xì)胞中觀察SRBSDV侵染后P5-1、P6和P9-1表達(dá)的先后順序,結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)SRBSDV侵染18 h時(shí),P9-1沒(méi)有表達(dá),P6的表達(dá)量稍多于P5-1,且以顆粒狀形態(tài)分布在細(xì)胞質(zhì)周圍;36 h時(shí),P5-1和P6都大量表達(dá),而此時(shí)P9-1也開(kāi)始少量表達(dá);隨著侵染時(shí)間的延長(zhǎng),P5-1,P6和P9-1的表達(dá)量都顯著升高;72h時(shí),三種非結(jié)構(gòu)蛋白均勻分布在細(xì)胞質(zhì)中。所以這三種蛋白表達(dá)的先后順序?yàn)镻6,P5-1和P9-1。其次,利用RNAi（RNAinterference... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 南方水稻黑條矮縮病毒的研究概況
        1.1.1 南方水稻黑條矮縮病危害、發(fā)生特點(diǎn)和癥狀
        1.1.2 南方水稻黑條矮縮病的寄主及傳播介體
        1.1.3 SRBSDV的基因組結(jié)構(gòu)與功能
    1.2 SRBSDV侵染誘導(dǎo)形成的病毒原質(zhì)形成機(jī)制
    1.3 昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用
        1.3.1 昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 昆蟲(chóng)細(xì)胞在桿狀病毒表達(dá)載體中的應(yīng)用
        1.3.3 昆蟲(chóng)培養(yǎng)細(xì)胞在水稻呼腸孤病毒中的應(yīng)用研究
    1.4 免疫熒光標(biāo)記技術(shù)的特點(diǎn)及其應(yīng)用
    1.5 RNA干擾(RNA interference,RNAi)的原理及應(yīng)用
    1.6 本研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 水稻和昆蟲(chóng)
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株和載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 體外培養(yǎng)白背飛虱細(xì)胞
        2.2.2 源于SRBSDV基因片段的dsRNA對(duì)病毒復(fù)制的影響
        2.2.3 免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)dsRNA處理后的細(xì)胞
        2.2.4 RTqPCR檢測(cè)dsRNA處理白背飛虱細(xì)胞對(duì)SRBSDV復(fù)制的影響
        2.2.5 Western blot檢測(cè)dsRNA處理后病毒原質(zhì)組分蛋白在白背飛虱細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量的變化
        2.2.6 重組穿梭載體的構(gòu)建
        2.2.7 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)SRBSDVP5-1、P6、P9-1蛋白
3 結(jié)果與分析
    3.1 白背飛虱細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.2 病毒原質(zhì)組分蛋白在昆蟲(chóng)培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)
    3.3 dsRNA抑制病毒編碼蛋白的表達(dá)對(duì)病毒復(fù)制的影響
        3.3.1 dsRNA抑制病毒編碼蛋白的表達(dá)對(duì)侵染率的影響
        3.3.2 dsRNA抑制病毒編碼蛋白的表達(dá)對(duì)病毒原質(zhì)形態(tài)的影響
        3.3.3 RT-qPCR檢測(cè)dsRNA處理對(duì)SRBSDV相關(guān)基因表達(dá)量的影響
        3.3.4 Western blot檢測(cè)dsRNA處理對(duì)SRBSDV相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3.4 目的載體的PCR驗(yàn)證
    3.5 桿狀病毒表達(dá)載體在Sf9細(xì)胞中的表達(dá)
4 討論
    4.1 培養(yǎng)細(xì)胞在病毒復(fù)制機(jī)制中的優(yōu)勢(shì)
    4.2 病毒原質(zhì)組分蛋白的作用機(jī)制
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]干擾水稻矮縮病毒（RDV）非結(jié)構(gòu)蛋白Pns11的表達(dá)可抑制病毒在介體黑尾葉蟬內(nèi)的復(fù)制[J]. 陳倩,張玲華,黃海寧,魏太云,謝聯(lián)輝.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2015(11)
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[5]抑制南方水稻黑條矮縮病毒非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1的表達(dá)阻礙病毒在昆蟲(chóng)體內(nèi)的增殖[J]. 曹金強(qiáng),王針針,陳紅燕,毛倩卓,賈東升,魏太云.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2015(03)
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[8]利用RNAi技術(shù)研究水稻瘤矮病毒P8蛋白在病毒裝配中的作用[J]. 劉華敏,鄭立敏,賈東升,李俊欽,陳紅燕,魏太云.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2014(11)
[9]利用RNA干擾技術(shù)治療中蜂囊狀幼蟲(chóng)病新方法取得進(jìn)展[J]. 夏曉翠,張馮斌,楊勤宏,方?jīng)_偉,馮棟,魏太云,周冰峰.  中國(guó)蜂業(yè). 2014(10)
[10]水稻黑條矮縮病毒在灰飛虱消化系統(tǒng)的侵染和擴(kuò)散過(guò)程[J]. 賈東升,馬元元,杜雪,陳紅燕,謝聯(lián)輝,魏太云.  植物病理學(xué)報(bào). 2014(02)

博士論文
[1]橘小實(shí)蠅RNAi及其對(duì)RNAi的免疫耐受機(jī)制研究[D]. 李曉雪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]SRBSDV和RRSV在介體飛虱體內(nèi)的侵染機(jī)理[D]. 賈東升.福建農(nóng)林大學(xué) 2013

碩士論文
[1]利用RNAi技術(shù)鑒定SRBSDV在白背飛虱體內(nèi)增殖的關(guān)鍵因子[D]. 曹金強(qiáng).福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[2]橘小實(shí)蠅rpl19 dsRNA對(duì)橘園非靶標(biāo)昆蟲(chóng)干擾效應(yīng)研究[D]. 陳愛(ài)娥.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]RNAi介導(dǎo)的百合雙抗LMoV和CMV病毒的研究[D]. 徐雷鋒.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]SRBSDV非結(jié)構(gòu)蛋白P6在病毒侵染白背飛虱過(guò)程中的功能分析[D]. 鄭勝蘭.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[5]南方水稻黑條矮縮病毒侵染細(xì)胞誘導(dǎo)形成病毒原質(zhì)的機(jī)制[D]. 韓慶梅.福建農(nóng)林大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3301412