大豆根腐病是大豆生產(chǎn)上的毀滅性病害之一,是一種典型的土傳性病害,其中部分病害就是由大豆疫霉（Phytophthorasojae）侵染大豆引起的。由大豆疫霉單獨(dú)引起的生產(chǎn)損失在世界范圍內(nèi)每年達(dá)到了 10-20億美元。大豆疫霉隸屬于卵菌,呈絲狀生長(zhǎng),在進(jìn)化上與藻類(lèi)相近,但是與真菌相差甚遠(yuǎn)。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在大豆疫霉中存在超過(guò)400個(gè)RXLR效應(yīng)分子。越來(lái)越多的研究證明,效應(yīng)分子對(duì)于病原菌的侵染過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,能夠從多個(gè)層面,以不同的機(jī)制完成侵染過(guò)程。利用植物表達(dá)載體對(duì)OG5_<sub>154821外泌家族蛋白的功能進(jìn)行研究。在大豆疫霉的基因組中存在著許多的外泌蛋白基因。除了典型的RXLR,CRN和NLP等家族外,還有許多功能未知的蛋白家族。通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選到OG5₁54821外泌家族,在侵染過(guò)程中高表達(dá)。利用植物表達(dá)載體在煙草上過(guò)表達(dá)該家族的部分成員基因,篩選到候選效應(yīng)分子Ps₁28701能夠引起細(xì)胞壞死,SignalP3.0在線預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),該候選效應(yīng)分子具有信號(hào)肽,利用酵母信號(hào)肽序列預(yù)測(cè)系統(tǒng)對(duì)其... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３?ＣＲＮ類(lèi)效應(yīng)分子的結(jié)構(gòu)分析

?下篇研宄內(nèi)容?第一章大豆疫霉ＯＧ５＿１５４８２１新型外泌蛋白家族功能鑒定???１．６利用酵母系統(tǒng)驗(yàn)證信號(hào)肽的功能??１．６．１重組質(zhì)粒的構(gòu)建??利用信號(hào)肽在線預(yù)測(cè)工具?Ｓｉｇｎａｌ?Ｐ?３，０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ－３．０／）??對(duì)目的蛋白序列進(jìn)行預(yù)測(cè)，然后將預(yù)測(cè)到的信號(hào)肽氨基酸殘疾序列構(gòu)建在??ｐＳＵＣ２Ｔ７Ｍ１３０ＲＩ（ｐＳＵＣ２）載體上，該載體含有一個(gè)縮短的逆轉(zhuǎn)錄酶基因ＳＵＣ２，但??是缺少起始密碼子和信號(hào)肽（Ｊａｃｏｂｓ?ａ／．，１９９７），載體上含有ＥｃｏＲ?Ｉ和Ｘｈｏ丨兩個(gè)??限制性內(nèi)酶切位點(diǎn)用于將目的基因片段構(gòu)建在載體上（圖丨－１）。??

?１．９．２?ＳｇＲＮＡ?的克隆??在大豆疫霉中，用ｐＹＦ２．２－ＧＦＰ－Ｒｉｂｏ－ｇＲＮＡ作為ｓｇＲＮＡ的載體圖（圖１－２），??ＲＰＬ４１為啟動(dòng)子，用ＲＮＡ聚合酶ＩＩ型調(diào)控元件來(lái)調(diào)控ＳｇＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄。同時(shí)在ｓｇＲＮＡ??的５＇和３＇端同時(shí)引入了核糖酶來(lái)移除圍繞在ｓｇＲＮＡ周?chē)倪^(guò)多的核苷酸從而保證??ｓｇＲＮＡ在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的準(zhǔn)確性（圖１－２）。核糖酶的設(shè)計(jì)是根據(jù)Ｇａｏ?＆?Ｚｈａｏ在２０１４年??發(fā)表的文章中提供的方法（Ｇａｏ?２０１４）。從給出的圖示中可以看到，兩個(gè)剪刀狀的??位置即為ｓｇＲＮＡ的剪切位點(diǎn)。為了確保ＨＨ－Ｒｊｂｏ形成正確的二級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)發(fā)揮核糖酶??功能，在我們?cè)O(shè)計(jì)靶標(biāo)序列引物時(shí)，根據(jù)２０?ｂｐ的靶序列，應(yīng)在ＨＨ－Ｒｉｂｏ區(qū)域的前??后設(shè)計(jì)６個(gè)堿基的互補(bǔ)序列，如圖１－３中綠色標(biāo)記的堿基序列所示。??ｐ－?．ｈ?ｙ????ｐＹＦ２．２－ＧｆＰ－Ｒｉｂｏ－ｇＲＮＡ??ＵＡ?＾?產(chǎn)３，??Ｇ?Ｇ?ＡＵ?—〇?／??Ａ?Ｃ?Ｃ－Ｇ?Ｇ—Ｃ??ｒ、Ｕ?Ｇ－Ｃ＼?Ｕ－?Ａ??Ｃ?Ｃ?Ｇ－ｃ＼?Ｃ－Ｇ??Ｃ－Ｇ?＼?Ｃ－Ｇ??ＡＡＡ＇＇Ｕｆ，?＿?＼ｒ－ｃ?＼?Ａ－ｕ??〇Ａ?Ｇ?


本文編號(hào)：3289754